Glucosa Postprandial

OBJETIVO

• Determinar la glucosa postprandial en suero por el método colorimétrico de la glucosa oxidasa.

• Comprender el fundamento de la determinación de glucosa postprandial.

INTRODUCCIÓN1

Glucemia postprandial

Consiste en la determinación de la glucemia a alas 2 horas de haber administrado 75 g de glucosa, sin otra ingesta calórica y después de 12 horas de ayuno total. Considerándose patológico valores superiores a 180 mg/dL a los 120 minutos de la ingesta. Sin embargo, en su valoración hay que tener en cuenta una serie de consideraciones. La utilización de la glucosa está alterada en personas con baja ingesta previa de hidratos de carbono o sometidos a dietas de adelgazamiento, por lo que los días precios a la prueba, el paciente debe controlar su dieta procurando que el consumo de carbohidratos sea superior a 150 g.

Determinación de la glucemia

Los métodos enzimáticos consiguen una gran especificidad, ya que utilizan enzimas purificadas que actúan selectivamente sobre la molécula de glucosa, no interfiriendo el resto de los hidratos de carbono o derivados que se encuentran fisiológicamente en los líquidos biológicos.

Método de la glucosa oxidasa

Es un método especifico para la glucosa, pues la enzima glucosaoxidasa (GOD) actúa oxidando a la beta-D-glucosa, con una mínima acción sobre la alfa-D-glucosa, la cual está presente en las soluciones en equilibrio con la forma beta. Habitualmente el punto de equilibrio se obtiene a través de mutarroración y se alcanza cuando existe un 36 por 100 en la forma alfa y un 64 por 100 en la forma beta. Para lograr una oxidación completa de la glucosa es necesario que ésta sea transformada completamente en la forma beta, es decir, debe producirse una mutarrotación total de alfa a beta durante el periodo de incubación, la velocidad con la que se produce la mutarrotación está afectada por el pH, el aumento de temperatura y, más específicamente, por una enzima, la mutarrotasa. Algunas preparaciones comerciales de glucosaoxidasa contienen la enzima glucomutarrotasa, que acelera específicamente este paso.

La reacción tiene dos fases, en la primera la GOD oxida la beta-D-glucosa:

Beta-D-glucosa GOD Gluconolactona H2O, O2 A. Glucónico + H2O2

La segunda fase se basa en la utilización de una sistema enzimático conjugado, en el cual el H2O2 formado se acopla a través de una peroxidasa (POD) a un receptor cromogénico (aceptor de oxigeno) y permite la medida fotométrica directa de la glucosa.

H2O2 + receptor cromogénico POD cromógeno + H2O

Como receptores cromogénicos se ha utilizado la orto-toluidina, que da lugar a un cromógeno verde, la fenol-4-aminofenazona, cromógeno rojo, etc.

Esta segunda fase es menos específica porque hay muchas sustancias reductoras que compiten con el receptor de oxigeno por el H2O2.

En algunos autoanalizadores se emplean electrodos selectivos de oxigeno, que por métodos polarográficos nos miden la velocidad de consumo de oxigeno, el cual sería directamente proporcional a la cantidad e glucosa de la muestra, permitiendo la determinación directa de la glucosa.

MATERIAL Y REACTIVOS

Material Reactivos Equipo

Material para toma de muestra por punción venosa, sistema de vacío.

Micropipeta

Gradilla

Tubos de ensayo

Puntas para micropipeta

Reactivo: fosfatos 100 mmol/L, fenol 5 mmol/L, glucosa oxidasa > 10 U/mL, peroxidasa > 1 U/mL, 4-aminoantipirina 0.4 mmol/L, pH 7.5

Patrón de glucosa. Glucosa 100 mg/dL (5.55 mmol/L).

Espectrofotómetro

MÉTODO

Resultados

Paciente: Hombre, 22 años.

Concentración de azúcar ingerida: 50 g/250mL

Tiempo de la toma Concentración de glucosa

0 min 54 mg/dL

60 min 58 mg/dL

Tabla 1.- Se muestra el aumento de concentración de glucosa después de ingerir el azúcar.

Gráfico 1.- Concentración de glucosa antes y después de la ingesta.

Discusiones.

Cabe destacar en primer lugar que los valores obtenidos son bajos, por lo que se sospecha que el reactivo esté parcialmente degradado.

La prueba realizada, al consistir en la administración de una sobrecarga

...