Lab. Bioquimica

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

ING. MANUEL BRICEÑO CABANILLAS

PAUCAR GUERRA ANDRES 2012020598

PRACTICA N°5 ANALISIS CUALITATIVO PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DE ENZIMAS

ANALISIS CUANTITATIVO PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DE ENZIMAS

Objetivos:

- Determinar la presencia de enzimas en objetos biológicos de origen animal o vegetal mediante reacciones químicas especificas

- Identificar la acción de la catalasa peroxidasa y tirosidasa

Fundamento

RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA

La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales. La función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada).Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se soluciona el problema.

1- La reacción de la catalasa sobre el H2 O2

, es la siguiente H2O2 2 H2O + O2

Esta función la efectúa esta enzima que cataliza su descomposición en agua y oxígeno. Ademásla catalasa se usa en la industria textil para la eliminación del peróxido de hidrógeno, así como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han esterilizado en una solución de peróxido de hidrógeno

2- El mecanismo completo de la catalasa no se conoce, aun así la reacción química se produce en dos etapas

H2O2+ Fe(III)-E→ H2O + O=Fe(IV)-H2O2 + O=Fe(IV)-E→HO + Fe(III)-E+ O2

Donde Fe-E representa el núcleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actúan como cofactores. (1)La enzima se presenta en forma de homotetrámero y se localiza en los paroxismos

Esta enzima puede actuar como una per oxidasa para muchas sustancias orgánicas, especialmente para el etanol que actúa como donante de hidrógeno. Las enzimas de muchos microorganismos, como el Penicillium simplicissimum

, que exhiben actividad de catalasa y peroxidasa, son frecuentemente llamadas catalasas-per oxidasas.

La deficiencia en catalasa produce acatalepsia. Esta enfermedad está caracterizada por la ausencia de actividad de la catalasa en los glóbulos rojos y se asocia con las lesiones orales ulcerantes

Reacción A

La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con el desprendimiento de oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada.

DESNATURALIZACION

Mediante esta experiencia, vamos a ver una propiedad fundamental de proteínas, que es la desnaturalización. Ya que la catalasa químicamente es una proteína, podemos desnaturalizarla al someterla altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, perderá también la función y como consecuencia su función catalítica, por lo que no podrá descomponer el agua oxigenada y no se observará ningún tipo de reacción cuando hagamos la experiencia anterior con muestras de tejidos hervidos.

AMILASA

La amilasa, denominada también sacarosa o ptialina, es unenzimahidrolasaque tiene la función de catalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-

4 del componente α

-Amilasa al digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares(sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas. Tiene actividad enzimática a un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre (amilamia). Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payenen1833, quien la bautizó en un principio con el nombre de "diastasa

Clasificación

α-Amilasa

(Nombre alternativos: 1,4-α-D-glucano-glucanohidrolasa; glucógenas) Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro, completamente a funcionales en ausencia de iones de cloruro. Actúan a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos, descomponiéndolos en dextrina desde la amilopectina. Dado que puede actuar en cualquier punto de la cadena es más rápida que la β-amilasa. En los animales es una enzima digestiva mayor y su pH óptimo está entre 6.7 y 7.2.

Β-Amilasa

(Nombres alternativos: 1,4-α-D-glucano-malto hidrolasa; amilasa sacar génica)

Otra forma de amilasa, la β-amilasa es también sintetizada por bacterias, hongos y plantas. Actúa desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrólisis del segundo enlace α-1,4, rompiendo dos unidades de glucosa(maltosa) a la vez. Durante el proceso de maduración de la fruta la β-amilasa rompe el almidón en azúcar dando lugar al sabor dulce dela fruta. La amilasa presente en el grano de cereales la responsable de la producción de malta. Muchos microorganismos también producen amilasa para degradar el almidón extracelular.

Los tejidos animales no contienen β-amilasa, aunque puede estar presente en microorganismos saprófitos del tracto gastrointestinal. Tiene un pH óptimo de 12

γ-Amilasa

(Nombres alternativos: Glucano 1,4-α-glucosadas; aminoglucosidasa; Exo-1,4-α-glucosidasa; glucoamilasa; α-glucosidasa lisosómica; 1,4-α-D-glucano glucohidrolasa) Además de romper el último enlace

α (1-4) glucosúrico en el extremo no reductor de la cadena de amilasa y amilopectina, liberando glucosa, la γ-amilasa puede romper los en la cesglicosídicos α (1-6). A diferencia de las otras amilasas esta forma es más eficaz en medios ácidos y su pH óptimo

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