Lab Bioquimica

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA N° 3

PROPIEDADES IÓNICAS DE LOS AMINOÁCIDOS

OBJETIVO:

Demostrar las propiedades ácido-base de los aminoácidos.

FUNDAMENTO:

Todos los aminoácidos son anfolitos los cuales contienen al menos un grupo funcional acídico (carboxilo) y uno básico (a-amino). Algunos aminoácidos contienen otros grupos que se ionizan fácilmente: grupos amino, carboxilo, phidroxifenilo, sulfihidrilo, guanidino e imidazol. El carácter iónico de los polipéptidos y las proteínas es en gran parte debido a estos grupos adicionales ionizables debido a que los grupo alfa-amino y carboxilo de los aminoácidos participan en los enlaces peptídicos. En esta práctica se estudia la reacción de aminoácidos cuando se adiciona un ácido o una base y se observa el cambio de pH. Además, después de cada adición de ácido o base durante una titulación, los resultados se pueden predecir por el uso de la ecuación general de Henderson-Hasselbalch.

MATERIALES Y REACTIVOS

Muestras de aminoácidos en polvo, NaOH 1N, HCl 1N, amortiguadores estándar. Balanza analítica, pH metro, barra y agitador magnético, bureta, pinzas para bureta, soporte, espátula, 8 vasos de precipitados de 100 ml, embudo.

PROCEDIMIENTO

Titulación de aminoácidos desconocidos.

Pesar cerca de 400 mg de muestra y disolverla en 20 ml de H2O en un vaso de precipitado. Introducir una barra magnética y colocarlo en una placa de agitación, así como el electrodo para medir pH. Titular la muestra disuelta desconocida con HCl 1N, registrando las lecturas de la bureta y el pH a intervalos frecuentes (cada 0,5 mL) hasta que la solución alcance un pH de 1.0. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulación. Titular otros 20 ml de agua (blanco) con HCl 1N, gota a gota en las primeras 10 gotas y de dos en dos gotas las siguientes 10 gotas. Finalmente de cuatro en cuatro gotas hasta que la solución alcance pH de 1.0 Registrar el pH y el volumen del ácido después de cada adición. Disolver otra muestra (otra vez aproximadamente 400 mg en 20 ml de agua) y titular la muestra con NaOH 1N de la misma manera que para la titulación con ácido hasta que el pH de la solución llegue a 12. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulación. También titular a 20 ml de agua (blanco) con NaOH 1N hasta pH 12.0 de manera similar que el primer blanco.

REPORTE

Hacer una tabla de resultados para cada titulación:

• Muestra con NaOH, Agua con NaOH, Muestra con HCl, Agua con HCl.

• Dibujar la curva de titulación verdadera siguiendo el siguiente procedimiento: Para determinar la curva de titulación verdadera de cualquier sustancia, se debe medir cuánto ácido o base se consume al titular el solvente (agua) en cada pH y entonces restar esta cantidad

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