Laboratorio N°3 microscopia

[pic 1]

Universidad Andrés Bello

Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Biología Celular BIO035

Laboratorio Nº 3: Microscopía

Nombres:

Valentina Chaparro                                                                                                                                              Priscila Ocares                                                                                                                                            Ricardo Pontigo                                                                                                                                                Paula Quiroz

Sección:

10 

Profesoras:

                 Fernanda Rodríguez                                                                                                                   Agustina Undabarrena

2016

Introducción

La microscopía es el conjunto de métodos y técnicas aplicadas para observar y estudiar muestras que debido a su tamaño no se logran ver a ojo desnudo, el tamaño de éstas es extremadamente pequeño en comparación con el rango de visión del ojo humano.

Generalmente se utilizan dos tipos de microscopios; el electrónico y el óptico, ambos nos permiten visualizar objetos a una escala microscópica. El microscopio óptico tiene una resolución de hasta los 0.1-1 µm, mientras el microscopio electrónico llega a una resolución mucho mayor, puede alcanzar hasta 4 Å (1). Se han realizado importantes avances en el estudio de células vivas, por medio del desarrollo de técnicas ópticas especiales. Estas técnicas ayudan a la visualización de material sin teñir. Las células y tejidos son observados por transparencia en cualquier tipo de microscopio. En las células la mayoría de sus componentes no logran ser observados directamente, porque son transparente a la región visible del espectro con la excepción de algunos pigmentos que atraen luz de ciertas longitudes de onda. La mengua absorción de luz de una célula viva se debe a que ésta es de alto contenido en agua. Un método para compensar esta limitación es aplicar colorantes que tiñan los distintos componentes celulares. Pero estas tinciones tienen un inconveniente ya que en la mayoría de los casos no se logra utilizar en células vivas. Los tejidos para ser observados correctamente deben ser fijados, deshidratados, embebidos en una sustancia endurecible, es decir, en una inclusión, después son cortados en láminas tan delgadas como para permitir que la luz del microscopio los atraviese con facilidad y luego de todos estos procedimientos se pueden al fin colorear o teñir. Al realizar todas estas operaciones en los tejidos es posible introducir algún cambio químico y morfológico en la muestra. (2)

En el práctico realizado se intentó observar y distinguir dentro de las células estudiadas, los distintos tipos de microorganismos que hay en ellas por medio del uso del microscopio óptico, si realmente se logra visualizar algún tipo de microorganismo u organelo dentro de las células observadas. Hay que tener en consideración ya que si no se manipula correctamente el microscopio no se podrán observar imágenes claras, y el práctico no se llevará a cabo como corresponde. Por ello se debe trabajar de una manera limpia y cuidadosa.

                                                                 Objetivos

• Definir microscopios.
• Calcular el diámetro del campo visual
• Observar tejidos y diferenciar las estructuras de muestras frescas y permanentes.
• A partir del diámetro del campo visual determinar el tamaño celular de una preparación biológica.

                                                  Materiales y Métodos

Actividad 1:

Se observaron las partes del microscopio y se calculó el aumento y la apertura numérica del sistema óptico (lentes oculares y objetivos) y de condensador.

Actividad 2:

Se procedió a visualizar una preparada letra “e” con el objetivo 4X, el cual se reguló utilizando los tornillos que posee a los lados el Microscopio. Se procedió a dibujar lo observado.

Actividad 3:

 Se tomó un portaobjeto y se le agregó una gota de agua destilada con un gotario, luego se colocó encima un cuadrado de papel milimetrado y se cubrió con un cubreobjeto. Se reguló de la misma forma que de la anterior, pero con el objetivo 4x. Después se calculó el diámetro del campo visual, cada cuadrado pequeño era de 1mm2, se contaron los cuadrados enteros y se calculó con la fórmula que se señalará en los resultados.

Actividad 4:

Se observó muestras biológicas permanentes (Frotis de sangre humana y Corte de Intestino delgado de Rattus norvegicus y hígado de especie no identificada) anteriormente entregadas, con el objetivo 40x. Se procedió a dibujar las tres muestras observadas.

Actividad 5:

Se determinó el tamaño celular de los eritrocitos a partir de la muestra de Frotis de sangre con todos los objetivos.

Actividad 6:

Se observó preparaciones frescas con y sin tinción.

-Tejido vegetal de Allium cepa: Se cortó de forma transversal un trozo delgado de cebolla con un bisturís, luego con un gotario se le aplicó una gota a un portaobjeto y encima de esta el trozo delgado de cebolla y posteriormente el cubreobjeto. Se limpió el excedente de agua y se observó en el microscopio con el objetivo 10x. Se repitió el proceso, pero esta vez se le aplicó tinción de azul de Metileno (se le aplicó antes de poner el cubre objeto). Se esquematizaron ambas observaciones, con y sin tinción.

...