POE de hemoglobina

OBJETIVO

Determinar la concentración de gramos de hemoglobina sobre decilitro de sangre mediante el método de Cianometa Hemoglobina

DOCUMENTOS DE REFERENCIA

• Manascero – Gómez, A., Díez – Ortega, H., Rodríguez – Pardo, V. & Acosta Báez, M. (2011). Hematología: principios básicos para la práctica (pp. 77 - 81). Editorial Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá D.C., Colombia.
• Brandan, N., Aguirre, M., & Giménez, C. (2008). HEMOGLOBINA (pp. 1). Cátedra de Bioquímica – Facultad de Medicina UNNE.
• Sáenz, G., Chaves, M., Valenciano, E., Montero A. & Jiménez, J. (s.f.). HEMOGLOBINOMETRÍA. NORMALIZACIÓN DE LA METOLOGÍA. PREPARACIÓN NACIONAL DEL ESTÁNDAR DE CALIBRACIÓN Y DE HEMOLIZADO CONTROL (pp. 84). Universidad de Costa Rica, San José.
• Revista Colombiana de Neumología, 13 N° 1. (marzo, 2001). Monóxido de Carbono, Fisiopatología. Sociedad Colombiana de Neumología y Cirugía de Tórax. Bogotá, D.C., Colombia.

FUNDAMENTO

Fundamento científico: la concentración de hemoglobina en g/dL de sangre tiene una dependencia con el número de eritrocitos y el contenido de hemoglobina que se encuentre en éstos, considerando que puede haber variables que puedan estar afectando lo anterior. De su concentración y calidad depende la oxigenación y el transporte gaseoso general en los tejidos de forma eficiente (pp. 77).

Fundamento técnico: la conversión de la Hemoglobina en un volumen sanguíneo (con anticoagulante EDTA) en HiCN, cuya absorbancia es leída en un espectrofotómetro a una absorbancia de 540 nm. Esta conversión se determina mediante la reacción con el reactivo de Drabkin, el cual permite tanto la hemólisis como la conversión final de toda la hemoglobina presente en HiCN (Manascero – Gómez, A., et al. pp. 77); es determinada mediante dos etapas: en la primera, el ferricianuro potásico (k3 Fe (CN)6) pasa el Fe+2 a Fe +3 (Hi) y, en la segunda, el cianuro potásico (KCN) convierte la Hi (metaHb) en HiCN (cianometaHb). Todos los derivados de la Hb (Hb, HbO2, HbCO, Hi) son convertidos en HiCN, excepto la HbS, sulfoHb (Sáenz, G., et al. pp. 84).

DEFINICIONES

• Hemoglobina: la hemoglobina corresponde a una proteína globular presente en los glóbulos rojos y su función es el transporte de oxígeno (O2) del aparato respiratorio hacia los tejidos periféricos; también de la conducción del dióxido de carbono (CO2) y protones (H+) desde los tejidos hasta los pulmones para ser excretados (Brandan, N., et al. pp. 1).
• Hemoglobina mediante el método Cianometa Hemoglobina (hemiglobincianuro, HiCN): corresponde a la medida de concentración de gramos de hemoglobina sobre decilitros de sangre (Manascero – Gómez, A., et al. pp. 77)
• HbO2: oxihemoglobina, O2 transportado por la hemoglobina (Revista Colombiana de Neumología, 2001).
• HbCO: carboxihemoglobina, CO transportado por la hemoglobina (Revista Colombiana de Neumología, 2001).

NORMAS DE BIOSEGURIDAD

Según Manascero – Gómez, página 78:

• Utilización de los implementos de seguridad (bata, gorro, guantes y careta).
• Descartar las puntas de las pipetas en un recipiente con hipoclorito de sodio.
• Descartar los tubos de sangre en un recipiente con hipoclorito de sodio.
• Implementos con sangre deben ser desechados en la caneca roja.
• Si se realiza venopunción para obtener las muestras sanguíneas, las agujas deben ser descartadas en el guardián.

CONDICIONES PRE – ANALÍTICAS

• Condiciones del paciente: Si la muestra de sangre se está probando sólo para la hemoglobina, se puede comer y beber normalmente antes del examen. Si se utiliza la muestra de sangre para pruebas adicionales, es posible que el paciente tenga que ayunar durante una cierta cantidad de tiempo antes del examen.
• Muestra: la muestra debe tomarse en tubo tapa lila con anticoagulante EDTA (Manascero – Gómez, A., et al. pp. 78).
• Medicamentos de importancia: cefalosporinas (un tipo de antibióticos), la penicilina y sus derivados, algunos antiinflamatorios no esteroideos o la quinidina
• Otros:  La dieta, el nivel de actividad, los medicamentos, el ciclo menstrual de una mujer, una transfusión sanguínea y otras consideraciones pueden afectar los resultados.

CONDICIONES ANALÍTICAS

• Materiales y equipos:
• Elementos de protección personal: bata, careta, gorro y guantes.
• Espectrofotómetro calibrado (es necesario situar previamente curva de calibración).
• Tubos 13 x 100 o cubetas del espectrofotómetro.
• Pipeta automática de 20 microlitros.
• Puntas para la pipeta.
• Pipeta de 5 mL.
• Pipeteador.
• Reactivo de Drabkin.
• Gaza húmeda.
• Curva o tabla de lectura de equivalencias de absorbancia.
• Procedimiento técnico para una muestra con sangre de tubo con anticoagulante EDTA (Manascero – Gómez, A., et al. pp. 79):
• Blanco:
• Tomar 20 L del reactivo de Drabkin en un tubo.[pic 1]
• Mezclar bien.
• Leer a diferentes longitudes de onda (400 a 600 nm).
• Graficar la curva.
• Determinar una concentración de hemoglobina en una muestra x:
• Marcar un tubo 13 x 100 con los datos del paciente e igualmente rotular: dilución.
• En ese tubo poner 5 mL de reactivo de Drabkin.
• Mezclar muy bien la muestra de sangre.
• Pipetear 20 L de sangre.[pic 2]
• Situar los 20 L de sangre en el tubo de dilución.[pic 3]
• Limpiar muy bien la punta de la pipeta.
• Introducirla en el tubo del líquido diluyente.
• Tomar 20 L y dispensar en otro tubo.[pic 4]
• Situar un tapón.
• Mezclar muy bien.
• Dejar reposar por mínimo 10 minutos.
• Leer la absorbancia a 540 nm.
• Comparar la lectura con la curva o tabla de equivalencias en informe de g/dL.
• .

CONDICIONES POST – ANALÍTICAS

Según Manascero – Gómez, et al.:

• Unidades para el informe (pp. 77): los valores para informar la concentración de hemoglobina son de gramos sobre decilitro (g/dL).
• Valores de referencia (pp. 81):
• Neonatos, sangre de cordón: 16,5 – 19,6 g/dL.
• Niños de un año: 11,2 – 16,5 g/dL.
• Hombres: 14,0 – 18,0 g/dL.
• Mujeres: 12,0 – 16,0 g/dL.
• Posibles errores técnicos (pp. 79 – 81):
• Mezclado ineficiente de la muestra, tomando la parte superior o inferior mal mezcladas.
• Mediciones inexactas en cuanto a la mala limpieza de la punta de la pipeta automática al tomar la muestra
• Que el reactivo de Drabkin no se encuentre en buen estado o si no se ha comprado en una casa comercial, no tener balanzas para medir los componentes para su preparación.
• La curva de calibración es muy importante para los equipos y los resultados que éstos darán, se debe establecer por lo menos una vez cada seis meses.
• El espectrofotómetro no se encuentra preciso y no se ha organizado una calibración y una limpieza de filtros.
• Si se realiza esta prueba mediante una muestra capilar, la mala punción puede causar la principal causa de error, pudiendo causar daño de las células tisulares y la consecuente liberación del líquido tisular, que diluirá la muestra, causando valores bajos.
• Una gota pequeña que no alcanza a llenar la pipeta provocará burbujas y la coagulación rápida de a sangre.

CONTROL DE CALIDAD

• Diferentes casas comerciales desarrollan hemolizados con cifras estándar de hemoglobina que permiten el control de la precisión y exactitud en el método. Es recomendable el uso de métodos de análisis de alta exigencia como Six Sigma, pues este nos permite la detección y prevención de errores en el proceso (Manascero – Gómez, A., et al. pp. 78).
• Observar que los tubos 13 x 100 a utilizar no se encuentren rotos.
• Las pipetas se deben encontrar en buen estado.
• Las puntas de las pipetas no deben cogerse con la mano, solamente se debe implantar con la pipeta y limpiar, si es necesario.
• El espectrofotómetro debe contar con un control diario, semanal y trimestral o semestral:
• Diario: Se debe limpiar el pozo de la cubeta con cualquier escobillón con agua destilada. También debe realizarse el control de longitud de onda, en donde se anota los valores de porcentajes T obtenidos con la solución NiSO4.6H2O a diferentes longitudes de onda.
• Semanal: se controla la exactitud de la absorbancia.
• Trimestral o semestral: se realiza la curva de control.
• Los elementos de protección personal deben encontrarse en buen estado.
• El reactivo de Drabkin debe encontrar se un lugar estable, donde se permita su conservación, también debe tenerse en cuenta la fecha de caducidad, si es un reactivo de casa comercial, si no, debe implementarse una balanza para que permita un buen uso del mismo.

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