PRUEBA RAPIDA DE VIH

No se desarrollan anticuerpos anti-HIV hasta después de la declinación en la viremia de HIV y pueden ser detectadas por primera vez dentro de las 2 a 8 semanas después de la infección. Por lo tanto, los ensayos serológicos generalmente no son útiles para diagnosticar infección por HIV aguda o primaria. Los anticuerpos persistentes indetectables más de 3 meses después de la infección son raros, y las comunicaciones iniciales de pacientes infectados por HIV serológicamente negativos por mucho tiempo no han sido confirmadas. Por lo general, la seroconversión comienza con una respuesta de la inmunoglobulina M (IgM) contra las proteínas Gag, con un cambio de los anticuerpos de tipo IgM por los IgG que ocurre en un período de 1 a 24 semanas.LA respuesta por IgM se superpone al período virémico y ses seguida de una respuesta por IgG en 5-7 días.La mayoría de los estudios comunicaron que las respuestas de IgG a las proteínas p24 y gp120 se desarrollan primero, seguidas por anticuerpos anti gp41 y contra las proteínas virales con masas musculares entre 50 y 60 KD. La elevación en los anticuerpos anti p24 coincide con una declinación en el antígeno p24 detectable. Por lo general, los títulos de anticuerpos IgG aumenta en los primeros meses después de la infección y luego se estabilizan. En una etapa más avanzada de la infección, los títulos de anticuerpos anti p24 pueden declinar por un aumento del antígeno p24; los anticuerpos contra otras proteínas virales, generalmente, persisten toda la vida.

En los adultos, las pruebas para anticuerpos anti HIV son consideradas positivas cuando un enzimoinmunoanálisis (ELISA) varias veces reactivo es confirmado madiante un ensayo más específico, como Western blot. Por lo general, se debe considerar que este hallazgo indica la infección actual por HIV. Una excepción a esta regla es un voluntario que ha recibido una vacuna experimental contra el HIV; en una sesión ulterior, se comenta con más detalle una análisis del enfoque para diagnosticar infecciones por HIV en esto individuos. Además, debido a transferencia pasiva de anticuerpos maternos, las pruebas serológicas no son útiles para diagnosticar infecciones por HIV en neonatos o lactantes de una madre infectada por HIV.

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Enzimoinmunoanálisis

El enfoque primario para investigar la infección por HIV establecida en los adultos comprende el uso de ELISA para la detección de anticuerpos. La mayoría de los procedimientos aprobados utilizan antígenos de HIV inmovilizados para fijar los anticuerpos IgG en muestra del paciente. Los anticuerpos anti HIV ligados forman complejos con anti-IgG humana marcada con enzima y son detectados en una reacción clorimétrica. El cambio de color resultante es cualificado mediante espectrofotometría y es proporcional a la concentración de anticuerpos en muestra original. Se determina un corte de absorbancia para cada ensayo sobre la base de muestras control positivas y negativas estandarizadas. Estos ensayos utilizaban originariamente lisados de virus enteros como antígenos. El uso ulterior de proteínas virales recombinantes y péptidos ha conducido a una mayor sensibilidad y mejor especificidad. Las Infecciones por cepas no subtipo B pueden ser pasadas por alto, debido a una mejor afinidad de los anticuerpos por los antígenos que habitualmente están incluidos en estos ensayos. La inclusión de antígenos del grupo O en ELISA desde 1994 ha aumentado la sensibilidad para detectar infección por cepas variantes, aunque la heterogeniedad pronunciada entre las cepas del grupo O continúa produciendo algunas reacciones falsas negativas. Los ELISA que utilizan antígenos peptídicos parecen ser menos sensibles para detectar cepas del grupo O que los que utilizan proteínas virales.

En general, la sensibilidad de los ELISA varía del 93 al 100%; la sensibilidad comunicada para las pruebas autorizada bajo condiciones experimentales óptimas es mayor del 99%. Se pueden presentar resultados falsos negativos de los ELISA durante la infección pro HIV primaria, en los paciente inmunosuprimidos (incluidos algunos pacientes con SIDA en estado avanzado), y con errores en el rotulado o la manipulación de las muestras. Además, los ELISA para HIV-1 son relativamente poco sensibles para la infección por HIV-2; las tasas de reactividad con sueros de pacientes con infección por HIV-2 documentada varían del 60 al 90%. El agregado de antígenos de HIV-2 reconbinantes ha conducido a ELISA que son sensibles para detectar ambos retrovirus. La especificidad de un ELISA repetidamente reactivo es alrededor del 99%. Las causas de ELISA falsos positivos son erró humano, hemodiálisis, una prueba de reaginas plasmáticas rápidas reactivas y problemas médicos simultáneos, como trastornos autoinmunes, mieloma múltiple, hemofilia y hepatitis alcohólica. Debido a las implicaciones clínicas de un resultado falso positivo del ELISA, las recomendaciones actuales para el diagnostico serológico de infección por HIV incluye un ELISA varias reacciones confirmando por un segundo ensayo. El segundo ensayo es más comúnmente un Western blot (véase mas adelante), aunque la Organización Mundial de la Salud ha declarado que se puede obtener una sensibilidad y una especificidad equivalentes cuando se realiza el diagnóstico utilizando dos ELISA que contiene antígenos diferentes y se basan en diferentes principios de ensayos. Este último enfoque puede ser más eficaz con relación al costo para los paciesen vías de desarrollo.

Tambien, en las Estados Unidos se comercializa un ELISA rápido para detectar anticuerpos anti HIV (Single Use Diagnostic System o SUDS. Murex Diagnóstics). Se agrega suero o plasma del paciente a una mezcla de cuentas de látex revestidas con antígeno del HIV-1. Los resultados positivos deben ser confirmados con otra prueba, como un Western blot, pero los resultados negativos se obtienen en un periodo de 10 a 15 minutos. Este ELISA rápido parece sumamente sensible y especifico mç, aunque puede haber resultados falsos positivos con una centrifugación insuficiente o con problemas en el procedimiento de las muestras. La modificación del ensayo ELISA y Western blot estándar han conducido a pruebas que pueden detectar con exactitud los anticuerpos anti HIV en saliva, lo que obvia la necesidad de la Flebotomía. Estas pruebas en saliva parecen tener sensibilidades y especificidades similares a las de las pruebas practicadas en suero o plasma.

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Western blot

El ensayo más utilizado para confirmar la reactividad del método

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