Practica De Fotosintesis

(PARTE B)

FOTOSÍNTESIS EN CLOROPLASTOS.

1. INTRODUCCIÓN.

La importancia del ATP en los organismos vivos ha hecho que muchos esfuerzos sean canalizados en la investigación sobre su formación. La hipótesis con que usted debe estar familiarizado 'propone que el trasporte de electrones en la cadena respiratoria resulta en un almacenamiento de energía contenido en algún compuesto intermedio" rico en energía". Este intermediario debe ser capaz de transferir su energía a ADP para formar ATP. Un compuesto intermedio similar fue propuesto en la fosforilación fotosintética, pero aún no ha sido posible aislar este compuesto químico intermediario de "alta energía".

Desde 1964, se propuso una segunda teoría que ahora encuentra suficientes evidencias disponibles para respaldada. Es llamado el "Modelo quimiosmótico" o de Mitchell, y propone lo siguiente: Durante el trasporte de electrones, iones de hidrógeno son trasportados a través de la membrana mitocondrial (en este caso tilacoidal) resultando por lo tanto un gradiente de protones. La energía que representa este gradiente puede ser utilizada por una ATPasa, para fabricar ATP (reacción reversible) a medida que los protones se filtran. Se ha sospechado que además existe un componente eléctrico.

Con respecto a la FOTOFOSFORILACION se ha demostrado que los protones son bombeados adentro del cloroplasto en la luz. Entonces si se crea un gradiente artificial a través de la membrana del cloroplasto, cambiando el pH del medio de ácido a básico, el ATP es producido en la oscuridad.

Desacopladores actúan previniendo el establecimiento de gradiente. El experimento a realizarse nos permitirá el cambio de pH en los cloroplastos y el efecto de algunos inhibidores en el trasporte de electrones.

2. OBJETIVOS.

Con esta práctica el estudiante podrá:

• Separar cloroplastos de hojas frescas de espinacas.

• Comprender el proceso de la fotosíntesis.

• Verificar, mediante el empleo del pHmetro, el modelo quimiosmótico llevado a cabo en las membranas de los cloroplastos.

3. MATERIALES.

• -Hojas frescas de espinaca

• Licuadora o mortero.

• Centrifuga clínica.

• Gasa.

• Tubos de centrífuga.

• Hielo.

• Peachímetro.

• Magneto.

• Agitador Magnético.

• Probetas.

• beakers.

• Paño negro.

4. REAACTIVOS.

• Medio de preparación:

Tris 20 mM.

KCI 40 mM.

Sucrosa 4 m.

pH 7.8.

• Medio de lavado:

KC140 mM.

MgCl2 2 mM.

Sucrosa 4 mM.

pH 7.8.

• Pyocianina.

• HCL 1.0 mM.

• NaOH 1.0 mM.

5.- METODO.

a. Preparación de cloroplastos.

Como este procedimiento toma algún tiempo, es necesario mantener la

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