Preparación De Material De Laboratorio Para Su Esterilización

Objetivo:

El alumno aprenderá a esterilizar el material de vidrio, instrumental de laboratorio y medios de cultivo para su posterior uso en el laboratorio.

Introducción:

Conocemos como esterilizar al proceso de llevar a cabo acciones físicas o químicas, con el objetivo de eliminar todo tipo de formas de vida como las bacterias, virus, hongos o cualquier otro tipo de microorganismos, incluyendo aquí las esporas y cualquier otro tipo de resistencia.

(Albert, 1997)

Para ello se utilizan una serie de aparatos con muy distintas características, estas mismas son las que le confieren un objetivo muy específico y le otorga la cualidad de llevar acciones concretas. Existe una gran variedad de medios por los cuales se puede llevar a cabo la esterilización pero los principales son: calor seco, vapor, gas oxido de etileno puro, mezcla de gases, radiaciones ionizantes, radiaciones no ionizantes y el plasma-gas. El método más aceptado y el más avanzado tecnológicamente es la plasma-gas, ya que es capaz de esterilizar de manera rápida, efectiva y no produce residuos tóxicos, por lo que respeta al usuario.

(Albert, 1997)

Sin embargo, en este proyecto nos enfocaremos principalmente en dos formas de esterilización, por calor seco y por calor húmedo o vapor. Consideramos que es importante realizar esta práctica porque es la base de realizar cualquier proyecto en el laboratorio ya que, si el material no es correctamente esterilizado, los resultados en experimentaciones posteriores pueden ser erróneos.

Para efectuar una esterilización por vapor se utiliza un aparato electromecánico llamado autoclave de vapor (equipos que esterilizan el vapor en la cámara, para la esterilización de los materiales), estas pueden ser analizadas por partes de la siguiente forma: las puertas de acceso, que deben producir estanqueidad en la cámara que se encuentre justo detrás de ella, con el fin de evitar que salga algún vapor caliente destinado a la esterilización; la cámara de esterilización, que es el depósito en el que se colocan los materiales para esterilizarse, ya sea en cestas o gradillas diseñadas para cada esterilizador; botones, interruptores, manómetros, relojes y válvulas, los cuales te brindan información fehaciente del funcionamiento y lugar del ciclo en el que se encuentra el proceso de esterilización. Los materiales que se deben emplear para envolver los instrumentos de laboratorio deben ser porosos y que no dificulten el paso del vapor (papel, tejidos, cajas o tambores metálicos, etc.). La temperatura mínima recomendada para la esterilización en la autoclave es de 121º C durante aproximadamente 15 minutos.

(Albert, 1997) (NOM-065-SSA1-1993, 1994)

Al esterilizar por calor seco se utilizan normalmente los hornos de laboratorio, que en ausencia de humedad, las temperaturas que se necesitan alcanzar para lograr la esterilización son mucho mayores. Los rangos de temperatura empleada (de 40º a 250º C) y los tiempos de exposición (de 1 min. a 2 hrs.) son muy variados, todo dependiendo del material que se busca esterilizar y a lo que se ha expuesto dicho material. Como grandes inconvenientes debemos destacar los largos tiempos de espera para el enfriamiento de los diversos materiales y el forzoso uso (en ocasiones) de embases especializados, hechos de aluminio, acero, plata o cualquier otro material capaz de soportar temperaturas superiores a los 160º C.

(Albert, 1997) (NOM-113-SSA1-1994)

Los microorganismos son mucho más sensibles al calor en un ambiente húmedo, por lo que es más factible esterilizar los medios de cultivo por calor húmedo, este método como ya lo hemos mencionado, consiste en la condensación sobre los objetos a esterilizar, que al hacerlo libera una gran cantidad de calor y eleva la temperatura tanto como la humedad del objeto. Es necesario tomar en cuenta que la presión y la temperatura son propiedades intensivas que se potencian entre sí.

(Albert, 1997)

En la práctica se pondrá a prueba la efectividad del método de esterilización por calor húmedo, utilizando como microorganismo del bio-indicador a la bacteria Escherichia coli de la cual se inocularán esporas en tubos de ensayo como “testigo positivo” y como “bio-indicador” observando así realmente la diferencia entre el tubo que sufrió un proceso de esterilización y el que no paso por dicho proceso, pudiendo calificar con dicha comparación la efectividad del procedimiento.

El ya mencionado tubo de ensayo correspondiente al bio-indicador es esterilizado por medio del autoclave por un tiempo aproximado de 15 minutos, a 15 lb/in2 de presión y bajo una temperatura aproximada de 121º C. Estas condiciones a las que será sometido el tubo de ensayo, son las mínimas requeridas o recomendadas para la correcta esterilización del material de laboratorio según el “Manual de Desinfección y Esterilización” de Albert Gálvez. Según la tesis de Samuel Lima, la E. coli es capaz de soportar temperaturas menores a los 61º C y este mismo microorganismo sometido a presiones de 18.125 lb/in2 o mayores provoca la eliminación de toda actividad biológica. Por esta razón al someter a dicho microorganismo bajo las condiciones ya planteadas, en la autoclave de vapor, es asegurada la efectividad del proceso de esterilización.

(Samuel, sin fecha)

Modificaciones al método y observaciones:

• No se introdujeron cajas Petri al autoclave para esterilizar por calor húmedo.

• No se hizo un lavado del material porque este ya estaba limpio.

• No se esterilizaron pinzas ni tijeras.

• Se colocó cinta testigo en un solo ejemplar de cada tipo de material.

• Los tubos de ensayo utilizados se incubaron a temperatura ambiente durante aproximadamente 96 horas.

Resultados:

En el material que introducimos en el horno para que este fuera tratado por medio de calor seco, pudimos observar que hubo un cambio de coloración en la cinta testigo. Esta antes de ser tratada presenta un tono amarillo claro, pero al ser sacada del horno presentó unas franjas de tonalidades café oscuro a negro. En la figura 1 se puede observar el material que fue tratado por el método de esterilización de calor seco.

Figura 1

En el material que fue introducido al autoclave para ser tratado por calor húmedo sucedió lo mismo que en el material sometido a calor seco. La cinta testigo presentó unas franjas inclinadas de color negro. En la figura 2 se puede apreciar el cambio de coloración en la cinta testigo de un matraz que fue tratado por el método de esterilización de calor húmedo.

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