Guía de práctica de laboratorio N* 01 Esterilización, preparación de medios de cultivo

GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N* 01

Esterilización, preparación de medios de cultivo

ASIGNATURA: FITOPATOLOGÍA GENERAL - R

DOCENTE: Dr. VICTOR HUGO CASA COILA

NOMBRES Y APELLIDOS: Gerardo Joel Gonzales anco.

GRUPO FECHA:

SEMESTRE

NOTA:

En el siglo IV a.c. Aristóteles recomendaba hervir agua como medida preventiva contra las enfermedades. La esterilización de instrumentos y vidriería utilizadas en laboratorio de Fitopatología se hace por métodos físicos y químicos.

Para cultivar microorganismos se emplea medios de cultivo, que contienen soluciones y sustancias nutritivas necesarias para su crecimiento y reproducción. La mayoría de los organismos cultivables crece en medio que contienen una fuente de carbono y nitrógeno, además de otros elementos en menor cantidad, como potasio, fosforo, azufre, hierro, zinc y vitaminas. La composición del medio de cultivo depende del microorganismo que se desea cultivar (Alfenas 8: Mafia, 2007).

• Medio de cultivo papa dextrose agar
• Extracto de papa 200 g /500 mL 500 mL
• Dextrose (=D-glicose) 20g
• Agar 20g
• Agua destilada 1 litro

Preguntas

- ¿Paraque sirve los medios de cultivo?

- ¿Por qué se debe de esterilizar los materiales, vidriería, medio cultivo?

Para presentar su informe, considere los siguientes ítems:

TITULO

RESUMEN

INTRODUCCIÓN

MATERIALES Y METODOS

RESULTADOS

BIBLIOGRAFIA

Cite las referencias encontradas conforme a formatos, ejemplo APA.

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* Número mínimo de páginas: 03

¡¡Buen trabajo!!

GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N* 01

Esterilización, preparación de medios de cultivo

1. Resumen:

En la primera practica en laboratorio vimos el material de laboratorio y las normas del uso del laboratorio, también vimos la esterilización de la vidriería con el método de calor húmedo en una autoclave. Posteriormente procedimos a preparar el medio de cultivo para poder reproducir esporos ellas próximas clases.

1. Introducción:

Es muy importante conocer y reconocer diferentes instrumentos o herramientas de laboratorio para que podamos utilizarlos correctamente, nombrarlos y entender para qué sirven.

Los laboratorios procesan múltiples muestras, las cuales pueden contener desde agentes infecciosos hasta residuos químicos que pueden alterar los resultados de las muestras o pruebas de laboratorio; por lo tanto, los materiales de laboratorio reutilizables deben limpiarse, desinfectarse y esterilizarse antes de que puedan volver a utilizarse sin problemas.

Un medio de cultivo es un grupo de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos. En la agronomía utilizamos estos medios para poder estudiar diferentes patógenos que son causantes de grandes pérdidas en la producción de cultivos.

1. Objetivos:

• Identificar y manejar el material básico de laboratorio.
• Aprender a realizar bien la desinfección del material de laboratorio.
• Preparar medios de cultivo correctamente.

1. Materiales y métodos:

1. Materiales:

• Papas 500gr.
• Agua destilada.
• Agar 20 gr.
• Papel periódico.

1. Instrumentos:

• Vaso de precipitado.
• Probeta.
• Cuchillo.
• Espátula.
• Bagueta de vidrio.
• Botellas de vidrio.

1. Equipos:

• Horno microondas.
• Balanza analítica.
• Autoclave.

1. Resultados:

• Reconocimos e identificamos el uso y la forma de uso correcta de los instrumentos y equipos de laboratorio:

• Vaso de precipitado: Se utiliza para medir el volumen de líquidos con el fin de transportarlos, mezclar sustancias y calentarlos. Su capacidad es desde 5 ml. hasta 10 litros.
• Probeta: Para medir pequeñas cantidades de líquido (de 5 ml a 2 litros).
• Cuchillo: Se usa para cortar muestras grandes.
• Espátula: Es utilizada para recoger insumos (sacar reactivos para pesar).
• Bagueta de vidrio: Se utiliza para agitar las soluciones y mezclarlas bien.
• Botellas de vidrio: Para almacenar soluciones y poderlas guardar.
• Autoclave: Es un recipiente de metal de paredes gruesas con un sello hermético que se puede utilizar para esterilizar instrumentos utilizando vapor a alta presión y temperatura.
• Balanza analítica: Sirve para medir la masa de las sustancias y objetos.
• Horno microondas: Se utiliza para calentar las soluciones en el laboratorio.

• Normas del laboratorio:

• El alumno ingresará al laboratorio con bata, es INDISPENSABLE guardar el comportamiento apropiado durante la estancia en el laboratorio.
• Está prohibido fumar, comer o beber en el laboratorio.
• Limpiar las mesas de trabajo antes y después de cada práctica, así también durante la práctica si se ha derramado algún reactivo o muestra biológica.
• No utilices nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento.
• Mantener los frascos de reactivos tapados para evitar derrames.
• Depositar en los recipientes apropiados las muestras y lavar las instrumentos inmediatamente después de su uso.

• Los materiales de laboratorio deben limpiarse y esterilizarse para evitar la contaminación de nuestras muestras por ello usamos el método de calor húmedo, este método “destruye los microorganismos por coagulación de sus proteínas celulares. La esterilización por vapor a presión se lleva a cabo en una autoclave” (Urcia & Guevara, 2002). Este equipo funciona como una olla a presión de 6 a 7 kilos de presión lo que permite que la cámara alcance una temperatura de 121ºC, no puede bajar ni subir de esta temperatura. La autoclave se lleno de agua hasta la marca, luego pusimos los instrumentos y cerramos bien, se hizo el calentado con las válvulas abiertas para expulsar el aire en el interior, luego se cerraron las válvulas y esperamos a que el equipo llegue a la temperatura y presión adecuadas para encender el temporizador por 30 minutos, terminando estos procesos se dejo enfriar sin abrir el equipo.
• Para preparar medios de cultivo correctamente seguimos los siguientes pasos.

• Cortamos la papa (solanum tuberosum) en cubos pequeños.
• Procedimos a cocerla con 500 ml de agua destilada en el microondas.
• Luego separamos la solución (liquido) de las papas (solido), nos quedo un aproximado de 400 ml (se perdió 100 ml en la cocción).
• El siguiente paso fue pesar 20 gr de agar y mezclarlo con la solución y un litro de agua destilada más.
• Posteriormente se calentó en el microondas para poder diluir bien el agar, este procedimiento duro 10 minutos aproximadamente.
• Por último, trasvasamos la solución en las botellas para ponerles papel periódico como tapa, luego de eso pusimos las botellas en la autoclave para su esterilización.
• Después de enfriar las guardamos en recipientes herméticos.

1. Preguntas:

• ¿Paraque sirve los medios de cultivo?

Se utiliza para crear un ambiente propicio para el desarrollo de microorganismos y su posterior estudio, en este caso será para reproducir patógenos que so causantes de grandes perdidas en nuestros cultivos.

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