Prueba De Toxicidad En Artemia Salina A Partir De Los Metabolitos Secundarios De Thymus Vulgaris.

Prueba de toxicidad en Artemia Salina a partir de los metabolitos secundarios de Thymus Vulgaris.

Isabel Cristina Hernandez, Diana Milena Salazar.

Fecha de presentación: 27 /11/2014

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Resumen

Un aspecto metabólico que distingue el reino animal del vegetal es la capacidad de las plantas y los hongos para producir sustancias que no son esenciales para su supervivencia. A esas sustancias se les denomina metabolitos secundarios, en los animales superiores raramente se producen. Por tanto, los vegetales, además de metabolitos primarios también producen metabolitos secundarios que cumplen funciones específicas como defensa, pigmentación, ornamentación, polinización, etc. El tomillo (Thymus Vulgaris) fue empleado para la identificación, purificación y extracción de sus metabolitos secundarios, de los cuales los flavonoides fueron los más representativos.

Palabras Clave: Metabolitos secundarios, tomillo (Thymus Vulgaris), espectrofotometría, toxicidad, extracción, artemia salina.

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1. Introducción

El metabolismo es el conjunto de reacciones químicas que realizan las células de los seres vivos para sintetizar sustancias complejas a partir de otras más simples .Las plantas como organismos autótrofos presentan metabolitos primarios y secundarios. Los metabolitos secundarios son sustancias de origen natural que no son vitales para el organismo que las produce, son menos abundantes que los metabolitos primarios, frecuentemente se observan en células u órganos especializados y están implicados en la regulación de las plantas con otros organismos de su entorno.

La función de los metabolitos secundarios no tiene por qué ser exclusiva, esto quiere decir que una misma función puede ser desempeñada por distintos tipos de metabolitos secundarios que se clasifican principalmente en tres grupos: terpenos (monoterpenos, diterpenos, sesquiterpenos, etc), compuestos fenólicos (fenilpropanoides y flavonoides) y compuestos con nitrógeno (alcaloides, glucósidos cianogénicos, etc). y se definen como compuestos orgánicos de origen natural (generalmente vegetal), nitrogenados, derivados generalmente de aminoácidos, de carácter más o menos básico y con variedad de funciones entre las que se destacan la defensa de la planta de insectos, facilita el transporte en la planta, regulación de crecimiento, propiedades antibacteriales y anticancerígenas.

La planta del género Thymus Vulgaris, es una especie perteneciente a la familia Lamiaceae que fue empleada para la identificación y purificación de los metabolitos secundarios; en esta pudieron encontrarse en mayor proporción los flavonoides que se definen como compuestos fenólicos constituyentes de la parte no energética de la dieta humana. Se encuentran en vegetales, semillas, frutas y en bebidas como vino y cerveza. Son pigmentos vegetales no nitrogenados. Su función dentro del mundo de las plantas parece ser la de atraer a los polinizadores hacia las flores.

Muchas veces los flavonoides son la respuesta adaptativa de las plantas a la intensa radiación ultravioleta, estos componentes protegen a las plantas de los nocivos efectos de estos rayos solares. Estos compuestos Son sintetizados a partir de una molécula de fenilalanina y 3 de malonil-CoA, a través de lo que se conoce como "vía biosintética de los flavonoides", cuyo producto, la estructura base, se cicla gracias a una enzima isomerasa.

Estos metabolitos se extranjeron con el fin de identificar los niveles de toxicidad a diferentes concentraciones en organismos vivos (artemias salinas).

Se tomó como resolución trabajar con el tomillo debido a que la mayoría de las personas no son conscientes de ello, pero este pequeño arbusto tiene más usos que algunos productos de marca. El tomillo se puede usar para cocinar, es un cosmético eficaz, tiene gran valor medicinal, e incluso se ve atractivo en un jardín. Conforme a esto los objetivos de esta práctica se propusieron para llevar a cabo la purificación, extracción, identificación, y reconocimiento de toxicidad del metabolito que se encontró en mayor proporción por la planta.

2. Materiales y métodos.

La realización del bioensayo se llevó a cabo con los siguientes materiales: Tomillo (Thymus Vulgaris), tubos de ensayos, reactivos de Dragendorff, Mayer, FeCl3, Shinoda, Wagner, Mg+ en láminas, espectrofotómetro, Cloroformo, Etanol, embudo de separación, hexano, beakers, probetas, goteros, sal marina, Artemia Salina, jeringa y agua destilada.

Los métodos empleados para llevar a cabo las diferentes pruebas fueron la identificación de principios activos por medio de pruebas de tubos de ensayo, las cuales se realizaron con diferentes reactivos para identificar los diferentes tipos de metabolitos secundarios; la espectrofotometría para medir el nivel de absorbancia de los diferentes metabolitos, y la extracción de los mismos por la adición de diferentes solventes para su posterior prueba de toxicidad sobre Artemia Salina.

Para realizar el bioensayo fue necesaria la intervención de tres prácticas en el laboratorio.

3. Procedimiento experimental

Las hojas de la planta de tomillo son las poseedoras de la mayor parte de metabolitos, por esto y por qué con ellas se facilita la extracción, se decidió trabajar con estas.

Las hojas se depositaron en un recipiente de vidrio con un porcentaje elevado de etanol y se dejaron en reposo por unos días hasta obtener un percolado en el cual estuvieran presentes las sustancias de interés para la práctica. A partir del percolado se obtuvo un extracto con los metabolitos secundarios.

La primera prueba que se realizo fue la identificación de principios activos, la cual describe en las siguientes etapas:

Se tomaron 12 tubos de ensayo y en cada uno se agregó 1 mL del extracto.

Para identificar la presencia o ausencia de alcaloides fueron empleados los reactivos de Dragendorff, Mayer y Wagner. En el primer tubo se agregaron dos gotas de este primer reactivo, en el segundo tubo dos gotas del reactivo de Mayer y en el tercero 2 gotas del reactivo de Wagner. Para el resultado positivo de las dos primeras pruebas se obtiene una coloración amarilla, para la tercera debe ocurrir un cambio de coloración de un verde oscuro y la característica determinante de la

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