Prueba OF (Metabolismo microbiano)

PRÁCTICA No.

Nombres

• Julieth Vanessa Carreño León        2171271
• Jelver Andres Pulido Moreno             2171030
• Carolina Hernández Marin                2171042        
• Antony Quiñones Camacho               2171025

Fecha de elaboración de la práctica: 07/15-05-2018
Fecha de presentación de la práctica: 21-05-2018

Introducción:

Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos como fuente de energía a través de la vía oxidativa o la vía fermentativa. La prueba OF (Oxidación/Fermentación) permite evaluar la capacidad que tiene determinado microorganismo de utilizar una u otra vía en su proceso de obtención de energía a partir del viraje del medio a color amarillo evidenciando la acidificación del medio como resultado de los procesos de oxidación o fermentación. En la vía oxidativa el aceptor final de electrones es el oxígeno, por lo tanto, es un proceso que se lleva a cabo en condiciones de aerobiosis (presencia de oxígeno), además, se presenta poca producción de ácido y se caracteriza porque a partir de esta vía hay producción de ATP.

En la vía fermentativa, el aceptor final de electrones es una molécula orgánica, por lo tanto es un proceso anaeróbico ( no hay presencia de oxígeno), se presenta alta producción de ácidos y la producción energética es menor en comparación con procesos de oxidación como la respiración. Para esta prueba se utiliza el medio semisólido de Hugh – Leifson, al cual se le añaden los carbohidratos que serán posteriormente utilizados por las bacterias para sus procesos de oxidación y fermentación.

Metodología: 

1. Se realizó la entrega de una bacteria respectiva a cada mesón de laboratorio.
2. Se llevó a cabo el análisis microscópico de la bacteria asignada a partir de un lámina que fue teñida con tinción de Gram y posteriormente se observaron sus características microscópicas (morfología y tinción)
3. Posteriormente, a partir de la cepa asignada, se llevó a cabo la siembra en el medio semisólido OF de la siguiente manera:
4. Con aza recta se tomó inóculo del medio, para esto se seleccionó una colonia para realizar las siembras. Se realizó la siembra de 2 tubos base, 2 tubos para Glucosa, 2 tubos para Lactosa y 2 tubos para Sacarosa, sembrados a partir de la técnica de siembra por picadura ( se realizaron tres picaduras en diferentes sitios del medio a una profundidad de 5 mm aproximadamente).
5. Uno de los dos duplicados fue sometido a condiciones anaeróbicas con el fin de evaluar las bacterias que realizan sus procesos metábolicas en ausencia de oxígeno, para esto se añadió a uno de los dos duplicados 1-1,5 ml de aceite mineral dispensados directamente sobre la superficie del medio.
6. Se concluyó la práctica con la lectura de los medios y el resultado de cada una de las pruebas metabólicas.

Resultados:

[pic 1]^[a]

[pic 2][pic 3][pic 4][pic 5][pic 6]

Discusión de resultados:

En el laboratorio, se cultivaron cuatro microorganismos para llevar a cabo la prueba OF de todos ellos. Aquel que correspondió a nuestro mesón fue Acinetobacter baumanii, una especie con morfología de bacilo y Gram negativa y, además, no fermentadora de azúcares [X]^[b]. Esta última característica se pudo evidenciar en el laboratorio debido a que ninguno de los azúcares en condiciones anaerobias fue aprovechado al no verse producción de ácido en los tubos que contenían aceite mineral y porque el color se mantuvo verde como se veía inicialmente sin algún cultivo, a excepción del tubo de glucosa, en el que se observa un pequeño cambio de color (lo cual indica que pudo haber presencia de un contaminante fermentador de dicho azúcar). Se analiza, entonces, que Acinetobacter baumanii es una bacteria aerobia estricta. En el mesón 1, se trabajó con Elizabethkingia spp., que en el laboratorio no produjo ninguna reacción oxidativa o fermentativa de algún azúcar, pero según literatura, debía ser oxidador de glucosa, pero solo se obtuvo aprovechamiento de la peptona del medio y producción de álcali; lo anterior pudo ocurrir porque talvez no era la cepa que se indicó. El mesón 3 cultivó Enterobacter spp. y se considera que se trata de un género anaerobio facultativo debido a que oxidó y fermentó todos los azúcares presentes; sin embargo, se notó una alta presencia de ácido en cada tubo, y se suponía que solo debía notarse en la primera ¼ parte del medio (la expuesta a la superficie y por donde se cultivó). Por último, el mesón 4 sembró Achromobacter spp., el cual no mostró reacción de ningún tipo, por lo cual se deduce que su ruta metabólica es diferente a la oxidativa y la fermentativa.

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