Práctica n°3: demostración de la actividad enzimática

PRÁCTICA N°3

DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

I. INTRODUCCIÓN

Los organismos vivos pueden obtener y gastar la energía más rápidamente debido a la presencia de catalizadores biológicos llamados enzimas. Las enzimas modifican la velocidad de una reacción, sin alterar el equilibrio final y solo requieren pequeñas cantidades para efectuar la concentración de un gran número de moléculas de sustrato

La alfa-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces a- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene, además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La a-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos) como productos.

Para medir la actividad enzimática de la a-amilasa, se utilizará la coloración que detecta el almidón. Para ello se contará con una solución de yodo, ya que el almidón en presencia de esta solución adquiere una coloración azulada característica. Esto tiene una explicación física: el iodo se coloca en el interior de la hélice que forma la amilosa (en las regiones hidrofóbicas), formando un complejo de color azul. Cuando la a-amilasa actúa, degrada la amilosa, se desintegra la hélice y por tanto en presencia de la solución de yodo, ya no dará una coloración azul, sino, coloración rojo ladrillo

II. PROBLEMA

 ¿Por qué es necesario para los humanos que la amilasa actúe sobre el almidón?

III. HIPOTESIS

 Como sabemos, el almidón es un polisacárido y la amilasa una enzima entonces esta romperá los enlaces de almidón y dará como resultado la amilosa, amilopectina y finalmente glucosa. En los tubos que contienen solución yodada o lugol permite identificar la presencia de almidón pues tomará un color azul mientras que en los tubos que contienen enzima permite identificar la glucosa y maltosa y para saber tomará será rojo ladrillo.

IV. OBJETIVOS

 Demostrar la acción de la amilasa de la saliva sobre el almidón

 Poder observar como actúa la amilasa (la saliva) como catalizador sobre el almidón, y entender cómo actúa este proceso en nuestro organismo.

V. MATERIALES y REACTIVOS

 Tubos

 Pipetas

 Buffer fosfato

 Enzima (amilasa salival)

 Agua destilada.

 Almidón

 Solución yodada.

 Solución NaCl 0,1 N

VI. PROCEDIMIENTO

• Preparación del sistema de incubación.

TUBOS

COMPONENTES I II

Solución de almidón al 0.1 % 5 ml 5 ml

Solución NaCl 0.1 N 1 ml 1 ml

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