REPORTE CASEINA.

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Universidad Autónoma de Nuevo León
Facultad de Agronomía

Evidencia de aprendizaje 3.2
Reporte de prácticas
“Aislamiento de Caseína”

Equipo: Julio Prieto Cadena 1490829, Teresa Serna Méndez 1564059, Jesús Silva Núñez 1562609, Cristina Moreno Ibarra 1555918
Materia: Bioquímica de Alimentos
Profesor: Dr. Guillermo Cristian Guadalupe Martínez Ávila

Introducción:

La leche la podemos definir como una secreción con un color blanquecino opaco, de sabor ligeramente dulce y con un pH cercano a la neutralidad; es producido por las glándulas mamarias de los mamíferos hembra; forma parte de la alimentación humana

La leche cuenta vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, ácido pantotéico y vitaminas A, D y K), minerales (calcio, potasio, sodio, fósforo y metales en pequeñas cantidades), con distintos tipos de proteínas clasificados, como: lacto albúminas, caseínas. En la leche, casi un 80% de las proteínas que están presentes, son caseína.

La caseína se encuentra en toda leche animal incluyendo la leche humana. Es una proteína conjugada de la leche del tipo fosfoproteína, formada por α-(s1), α-(s2)-caseína, ß-caseína, y kappa-caseína, que se separa de la leche por acidificación y forma una masa blanca. La alfa y la beta caseína no son solubles en la leche, si está presente la kappa-caseína, se forma un complejo de caseína que es solubilizado en forma de micela, la cual está estabilizada, mientras que el alfa y beta son las fosfoproteínas que se precipitan en presencia de iones de calcio. Contiene un gran número de aminoácidos, entre los cuales los más importantes son los ácidos: glutámico, leucina y prolina.

Una de las propiedades que caracteriza a la caseína es su baja solubilidad a un pH de 4,6. El pH de la leche es 6,6 aproximadamente, estando a ese pH la caseína cargada negativamente y solubilizada como sal cálcica. Para esto si se añade ácido a la leche, la carga negativa de la superficie de la micela se neutraliza (los grupos fosfato se protonan) y la proteína neutra precipita.

Propósito:

Obtener la cantidad de Caseína en distintas marcas de leche, todos ellas de vaca, conocer el rendimiento en peso de caseína por cada muestra y comparar los resultados para observar la diferencia de Caseína entre cada una de las marcas, teniendo en cuenta que la Caseína representa el 80% total del peso de la leche, ya que esta es la proteína más abundante en la leche.

Materiales y métodos:

- Muestra de leche  

- Ácido clorhídrico al 2%

- Etanol

- Agua destilada

- Micro pipeta con puntilla

- 2 tubos Falcón de 50 mL

- 1 probeta de 100 mL

- 2 Vasos de precipitado de 100 mL

- Espátula

- Embudo

- Papel filtro

- Balanza analítica

- Aguaitador magnético

- Plancha de agitación

- Potenciómetro

- Estufa de secado

- Centrifugadora

Procedimiento

1. Primero hicimos una mezcla de 50 mL totales con leche y agua 1- 4
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2. Agitamos hasta homogenizar bien la mezcla
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3. Llevamos a la plancha de agitación, agregamos los agitadores magnéticos y con ayuda del potenciómetro llevamos a la mezcla a su punto isoeléctrico agregando poco a poco ácido clorhídrico al 2%   (pH = 4.6)
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4. Dejamos reposar la mezcla durante 5 min
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5. Eliminamos el suero con ayuda de una micro pipeta
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6. El resto de la mezcla que quedo en el vaso  después de eliminar el suero la pasamos a un tubo falcón
7. Agregamos el doble de volumen de la mezcla restante de agua en el mismo tubo falcón y agitamos hasta homogenizar nuevamente
8. Pesamos el tubo falcón y llenamos uno a la par de pura agua al mismo peso.
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9. Lo pusimos en la centrifugadora por 5 min a 10,000 rpm
10. Le retiramos el líquido y el sólido fue lavado con etanol al 70%
11. Nuevamente lo llevamos a la centrifugadora y repetimos los 5 min a 10,000 rpm
12. Retiramos el líquido, pasamos la pastilla a un papel filtro y la enjuagamos con isopropanol
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13. Dejamos que escurriera todo el líquido restante y pasamos la pastilla en el papel filtro a la estufa de secado
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14. Dejamos secando por 24 horas
15. Pesamos el papel filtro con la pastilla ya secos y le restamos el peso del papel filtro
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16. Teniendo el peso le sacamos el 80% y tuvimos la cantidad de caseína de nuestra muestra (Leche Lala semidescremada)

Obtención de la caseína

Resultados

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