Reacción de los Aminoácidos

2. Reacción de los Aminoácidos:

a) Reacción de la Ninhidrina:

Preparamos soluciones de los aminoácidos (1g/l); Glicina, Lisina y triptófano, para ello pesamos 0,025g, por separado cada aminoácido y disolvemos cada uno con 25ml de agua destilada.

Vertemos 2ml de las soluciones de los aminoácidos preparados en sendos tubos de ensayo y agregamos a cada uno unas 3 a 5 gotas de solución de Ninhidrina. Hervimos los tubos durante 2 minutos y anotar en cuantos segundos reaccionan a un color violáceo.

b) Reacción Xantoproteica:

Marcamos dos tubos de ensayo pequeño y vertimos por separado 0,5ml de las soluciones de aminoácidos (1g/L) Tirosina y Triptófano. Añadimos a cada tubo 0,5ml de HNO3 concentrado y los dejamos enfriar después de agitarlos.

Agregamos a cada tubo suficiente cantidad de solución de NaOH 10M hasta que las soluciones sean fuertemente alcalinas. Si las soluciones dan una coloración rojo anaranjada consideramos positiva la reacción.

c) Reacción de Millón:

En un tubo de ensayo pequeño vierta 1ml de solución de Tirosina, luego añadir al tubo 5 gotas del reactivo de Millón (Nitrato mercurioso y mercurio en ácido nítrico 1:3. agregar 2 volúmenes de agua). Calentar el tubo de agua hirviendo por 10 minutos. Luego lo dejamos enfriar a temperatura ambiente y le agregamos 5 gotas de solución de nitrito de sodio (10g/L). Si se vuelve una solución rojiza se da como positiva la reacción.

d) Reacción de Molish:

Añadir unas gotas de alfa- naftol alcohólico y agitar. Luego echar cuidadosamente con un embudo de separación (el color del anillo formado es muy leve, observar cuidadosamente). Esta es una reacción debida a la presencia de un grupo hidrocarbonato en la molécula proteica.

3. Composición Cualitativa de las Proteínas:

En un tubo de ensayo pequeño verter 2ml de albúmina de huevo (solución de proteína). En la boca del tubo suspender un pedazo de papel rojo de tornasol y otro pedazo de papel reactivo de acetato de plomo, calentar el tubo hasta carbonizar.

4. Pruebas coloridas:

a) Preparación de la solución madre (solución A): En un vaso de 100ml vertimos 10ml de clara de huevo y añadimos 40ml de agua destilada, filtramos (con gasa) y recogemos el filtrado en otros vaso de 100ml, al que lo denominaremos solución A.

b) Reacción de Biuret: En un tubo de ensayo poner 2ml de la solución A, añadir 1ml de solución NaOH al 40%. Agitar bien el tubo y añadir gota a gota solución de CuSO4 al 1% hasta que observamos cambios.

c) Prueba de Ninhidrina: En un tubo de ensayo verter 2ml de solución A, añadir unas 5 gotas de solución de Ninhidrina al 0,1%. Hervir durante 2 minutos.

5. Precipitación y Desnaturalización de Proteínas:

a) Con ácidos y bases fuertes:

En un tubo de ensayo verter 2ml de la solución A, añadir 1ml de HNO3 concentrado. Observar la formación de capas.

En otro tubo de ensayo poner 2ml de la solución, añadir 1ml de solución de NaOH al 40%. Observar.

b) Con ácidos débiles:

En un tubo de ensayo verter 2ml de la solución A, añadir unas 5 gotas de ácido acético al 5% agitar y añadir gota a gota solución de ferrocianuro de potasio al 10% hasta que observamos la formación de un precipitado.

Agregamos a cada tubo suficiente cantidad de solución de NaOH 10M hasta que las soluciones sean fuertemente alcalinas. Si las soluciones dan una coloración rojo anaranjada consideramos positiva la reacción.

...