Reconocimiento de las propiedades intrínsecas de Mentha pulegium

Reconocimiento de las propiedades intrínsecas de Mentha pulegium. 

Presencia de antioxidantes, y su efecto en el crecimiento de cepas bacterianas y Botrytis cinerea.

Introducción

El poleo (Mentha pulegium L.) es una especie herbácea perenne, nativa de zonal mediterráneas, Europa meridional y el norte de Asia (1). Se reconocen sus propiedades medicinales, especialmente contra enfermedades estomacales y resfrío. Se utiliza en forma de infusiones, compresas, jarabe, etc. (1). De la planta se colectan las hojas y flores, las cuales se utilizan secas o frescas, o preparando un aceite esencial (2). El aceite esencial contiene cetonas terpénicas, predominando pulégona (70 al 90%), que otorga propiedades abortivas a M.pulegium L.; además contiene mentona, isomentona, piperitona, limoneno, dipenteno. (3)

El establecimiento de las propiedades antioxidantes en una planta es el primer paso para el desarrollo de futuras investigaciones y posteriores aplicaciones. Existen varios métodos para medir cuantitativamente la capacidad antioxidante de un compuesto o extracto, en este caso vegetal, siendo el más usado la reducción del radical libre estable 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH).

Un radical libre es cualquier especie que contiene uno o más electrones desapareados y que es capaz de mantener una existencia independiente. En estas condiciones, busca a toda costa otro electrón para poder parearse. Es esta intensa búsqueda la que hace a estos radicales libres extremadamente reactivos. (Ej: Hidroxilo, Peroxilo, Superóxido, Hidroperóxilos)

Los antioxidantes son Moléculas que a bajas concentraciones, respecto a las de un sustrato oxidable, retardan o previenen su oxidación.

El antioxidante al chocar con el radical libre cede un electrón, se oxida y se transforma en un radical libre débil no tóxico. (Ej: Vitamina E, Vitamina C, Selenio, Flavonoides)

Existen mecanismos de detección de la actividad antioxidante, entre ellos se encuentran:

HAT, Transferencia de un átomo de Hidrógeno, y ET, Transferencia de electrón.

El método ET se vale de una sonda (Elemento Oxidante) y el agente dador de electrones (El Antioxidante)

El método HAT usa ORAC, TRAP, CROCIN, LINOLEICO y CARS, mientras que ET usa ABTS (2,2'azinobis(3-etilbenzotiazolina-6-acido sulfonico)), DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazilo) y DMPD, los que donan su electrón.

El método ABTS para cuantificación de actividad antioxidante consiste en la utilización del compuesto cromógeno ABTS, de color azul-verde y máximo de absorción a 342nm. El radical de este compuesto se forma por acción enzimática o químicamente, cambiando sus características de absorción, con máximos a 414, 645, 734 y 815nm. Con esto es posible medir actividad de compuestos coloreados (luz visible), reduciendo la posibilidad de error al usarse frecuencias cercanas al infrarrojo. (4)   

El DPPH no dimeriza, como la mayoría de los radicales libres, y presenta un color violeta característico que absorbe a 520nm. Cuando se mezcla una solución de DPPH con una sustancia que sea capaz de donar un protón (H+), se pierde el color violeta y se observa un color amarillo pálido, debido a que la molécula tiene un par de electrones libres con los que puede captar un H+, reduciéndose. (5)

Figura 1. Reducción de DPPH a su forma no radical.

[pic 1](5)

Por este método entonces, se puede estimar la capacidad antioxidante de un extracto vegetal, midiendo la extinción del color violeta y la aparición del color amarillo, por métodos espectrofotométricos. Se puede estimar la concentración eficiente o parámetro EC50 (o IC50), que es la concentración del compuesto antioxidante activo que produce la desaparición del 50% de la forma radical de DPPH. (5)

Objetivos

Objetivo general

• Caracterizar a M. pulegium.

Objetivos específicos

• Cultivar y micropropagar a M. pulegium in Vitro.
• Realizar extractos fenólicos de  M. pulegium y determinar las propiedades antioxidantes de dichos extractos.
• Establecer si M. pulegium puede ser utilizado como agente antifúngico o antibacteriano.

Metodología

Cultivo in vitro: Micropropagación

Tallos con hojas de M. pulegium de 15cm de alto, se cortaron a 5-10cm de la base y se lavaron con agua corriente frotando tallo y hojas.

Se cortó los tallos seleccionados, la zona de la yema axilar de éstos, obteniéndose un trozo de tallo con hoja de 2cm aproximadamente.

Bajo campara, en condiciones estériles, se procedió a poner los trozos de tallo en solución de hipoclorito de sodio comercial al 20% (0,5-1,6% NaClO) y agua con agitación constante 2 veces, durante: 15min la primera y 5min la segunda vez y se enjuagó finalmente con agua destilada estéril. Cada nuevo lavado de desinfección se realizó con nuevos materiales estériles.

Posterior a ésto, en las mismas condiciones de esterilidad, se procedió a cortar el tallo y parte de la hoja para eliminar zonas muertas de la planta debido al tratamiento, quedando yemas axilares de un tamaño más reducido (~ 1 cm). Las yemas axilares se colocaron sobre un agar de soporte en posición vertical.

Se dejaron los explantes en una cámara de cultivo con ciclos de luz de 16Hrs y temperatura regulada.

Determinación de actividades biológicas.

Extracción alcohólica de poleo.

Se realizaron dos extracciones utilizando etanol al 85% y metanol, respectivamente. Para ello, se recolectó una porción de la planta, correspondiente a 1g  (hojas, flores y  tallo),  la que fue  lavada con agua destilada y posteriormente macerada con 10mL de solución). Luego se traspasó a un tubo Falcon que fue cubierto con papel aluminio, se  sonicó por 3 hras. y se dejó almacenado a 4°C durante una semana para su posterior análisis biológico.

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