Reporte de safranina

. Introducción 

El color de las sustancias se debe a que éstas absorben una determinada longitud de onda de la luz blanca que incide sobre dicho objeto, y sólo vemos la longitud de onda que se refleja.

El espectrofotómetro es un aparato que sirve para cuantificar la absorbancia (la cantidad de luz que absorbe una muestra) y la transmitancia (la cantidad de luz que no es absorbida por la muestra) de ciertas sustancias mediante un haz de radiación electromagnético con una proporción 1:1 e inversamente proporcionales.

En biología utilizamos distintos pigmentos para contrastar ciertos compuestos, organismos, biomoléculas, etc. La safranina en especial sirve para dar coloración al núcleo celular.

La colorimetría es la técnica utilizada para obtener la concentración de un líquido analizando su intensidad de color. Esta mide la cantidad de luz transmitida por una muestra a una longitud de onda determinada.

1. Objetivos 

1. Que el alumno aprenda el uso, manejo y cuidados del espectrofotómetro.

2. Que elabore una curva patrón y la emplee para determinar la concentración de

una muestra problema.

3. Que determine la importancia del uso de la colorimetría en la investigación en Biología.

1. Metodología 

En esta práctica, como recordaremos, tenemos como objetivo la elaboración de la curva patrón con respecto a la concentración de safranina, principalmente.
Comenzamos enumerando los tubos de ensaye del 1-7 con sus correspondientes primos, proseguimos a adicionar el volumen  de agua destilada y safranina que se indican en la tabla de concentración, se utilizó una pipeta de 10ml y una de 1ml. Continuamos en el espectrofotómetro (en base al estudio previo del uso, manejo y cuidado del mismo), utilizamos el vaso número 1 o blanco perfectamente limpio ya que las huellas de los dedos obstruyen la luz y no se tiene un dato preciso. Se calibró a cero y se determinó la longitud de onda; que en este caso fue de 520 nm, después colocamos en 100 la transmitancia para calibrar por completo el aparato. Retiramos el blanco del tubo y adicionamos la muestra del tubo número 2  el cual tenía una concentración de 0.05 ml de safranina y se indicaron los niveles tanto de transmitancia como de absorbancia, continuamos con el mismo procedimiento con los otros 6 tubos incluyendo la solución problema.

Obtenidos ya los datos necesarios de absorbancia se realizó la elaboración de la curva patrón de los tubos 2 al 6.

Para hacer los cálculos correspondientes de la concentración de cada tubo se utilizó el método gráfico, se calculó  la concentración de  safranina dividiendo cada dato obtenido de la absorbancia entre la pendiente (Y2 - Y1X2 - X1 ), los datos resultantes de la concentración se colocaron en la gráfica al igual que la absorbancia y  nos dio como resultado una recta ascendente, se interpolaron los datos obtenidos de absorbancia de la solución problema y así pudimos determinar su concentración.

1. Resultados 

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Gráfico 1 Elaboración propia

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Gráfico 2 Elaboración propia

1. Análisis y Discusión

Respecto a los resultados obtenidos por medio del uso del espectrofotómetro pudimos obtener valores de transmitancia y absorbancia para un análisis de la concentración de safranina (Hernández y González, 2002).

Los puntos obtenidos en la tabla muestran que a mayor concentración de safranina aumenta la absorbancia y disminuye la transmitancia. Interpolando estos puntos se obtuvieron dos gráficas una de transmitancia y otra de absorbancia y al compararlas podemos determinar que son inversamente proporcionales, puesto que una curva resultante es una recta creciente mientras que la otra se muestra como una hay un grupo metilo y en la clorofila b hay un grupo aldehído, la clorofila a resulta en un color asíntota decreciente respectivamente (Skoog et al., 2007).

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