TENCION GRAM

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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA[pic 2]

Calidad, Pertinencia y Calidez

VICERRECTORADO ACADÉMICO

DIRECCIÓN DE NIVELACIÓN Y ADMISIÓN

PRIMER SEMESTRE/2015

INFORME:

TENCION GRAM

ESTUDIANTE:

NUMERO DE LISTA: 12

ÁREA:

SALUD

ASIGNATURA:

BIOLOGÍA

PARALELO:

V01

 EL ORO – MACHALA - ECUADOR

2015

 TEMA: Tinción Gram

OBJETIVOS:

• Identificar bacterias Gram + y Gram – mediante la tinción de Gram
• Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos, al igual de la aplicabilidad clínica de la tinción.

MARCO TEÓRICO

La tinción GRAM es uno de los procesos más utilizados a la hora de determinar al microscopio óptico la filogenia de un microorganismo. Siendo una de las primeras pruebas que se hacen para clasificar a un posible patógeno. Fue desarrollada en 1884 por el bacteriólogo danés Christian Gram. El proceso tradicional fue mejorado por Hucker en 1921, hallando la manera de que los reactivos fueran más estables y mejorando la calidad diferenciadora del proceso. Existe otra modificación diseñada por Kopeloff en 1923 que permitía teñir de forma más eficiente aquellas bacterias de difícil tinción, sobre todo las anaerobias. No obstante la explicación de porqué se teñían de forma diferente tuvo que esperar hasta 1974 cuando Gregersen estableció que las diferencias entre las GRAM+ y las GRAM- eran debidas a la diferente composición de la pared celular. (Corralo, 2015)

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Detalle de la pared de las bacterias GRAM+ y GRAM- donde se puede apreciar la diferencia entre los péptidoglucanos.

Aunque las Archaea también responden a la tinción GRAM, son las especies del Reino Bacteria las que se dividen tradicionalmente entre las GRAM+ (GRAM positivas) que son aquellas bacterias que se tiñen con este procedimiento y las GRAM- (GRAM negativas) que no retienen el tinte. (GUIA , 2012)

2.-MATERIALES Y MÉTODO

PRACTICA N.1

El primer procedimiento que realizamos fue con ayuda de nuestro profesor, ya que era de colocar en el porta objeto una muestra de la Bacteriana por lo  que es un poco peligroso y delicado de realizar solos, al colocar la muestra de la bacteria con la ayuda de ( Asa Bacteriana) ,luego  le coloco una gota de Suero Fisiológico y  luego procedemos a realizar los siguientes pasos solos con  su debida precaución.

PASO  N. 1

Procedemos a fijar la muestra  con el mechero, colocamos 1 o 2 gotas  de Cristal violeta   hasta  tapar la muestra, esperamos 60 segundos, lavamos y recurrimos cuidadosamente.

PASO N.2

Luego de lavar y escurrir el porta objetos, colocamos 3 gotas de Lugol, esperamos  60 segundos pero  en este paso no se Lava.

PASO N.3

En el tercer paso colocamos Alcohol - cetona y no lavamos.

PASO N.4

Colocamos  una gota de safranina y luego procedemos a lavar, enjuagar y terminamos de  secar con el mechero  

PASO N.5

Procedemos a llevar  la muestra ya preparada a ubicarla en el microscopio, sin colocar el cubre objetos  y  observar con (10 X)

3.- CONCLUSIONES:

• La tinción de Gram es una herramienta muy útil en el laboratorio de microbiología así como en los análisis clínicos y diagnostico medico siendo ineludible conocer su fundamento y procedimiento, para poder tener una correcta interpretación de los datos que nos otorga la diferenciación de Gram positiva y negativa concluyendo que debido a la estructura de sus paredes celulares
• Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana.
• Permite el empleo de mayores amplificaciones. 
• Tanto las bacterias Gram positivas como las Bacterias Gram negativas se presentan morfológicamente como cocos o bacilos, sin embargo al ejecutar tinción de Gram en estas para identificar su grupo taxonómico, las Gram positivas se tiñen de color violeta mientras que las Gram negativas se tiñen de color rosado.
• Las bacterias son causantes de infecciones y enfermedades. 

4.- RECOMENDACIONES

• Entrar al aula de manera ordenada y correctamente uniformados.        
• Utilizar adecuadamente y correctamente los materiales del laboratorio, para no romperlos o hacernos daño con ellos.
• Colocar la cantidad adecuada en cada porta objetos
• Estar pendientes de tiempo
• Retirar con mucho cuidado los porta y   cubre objetos para no dañara nada

5.- CUESTIONARIO

1. ¿De los reactivos que se usó para la tinción de Gram, ¿Cuál es el que funciona como colorante primario?

 El Violeta cristal es el que funciona como colorante primario

2.  ¿Cuáles son las fuentes de errores  más comunes en la tinción de Gram?

Los peores obstáculos de la Tinción, que impiden conseguir el resultado perseguido, son los errores del técnico. Para evitarlos hay que elegir bien los reactivos y ser muy cuidadosos al ejecutar la técnica. A continuación describimos algunas de las fuentes de error: Impurezas en los reactivos de Tinción.

Concentración inadecuada de los reactivos de tinción.

pH inadecuado. 

El colorante se fija a la célula por mecanismos físico-químicos, que se alteran si el Ph no es el apropiado. 

Los colorantes pueden ser ácidos, básicos o neutros.

Tiempo de Tinción incorrecto.

Temperatura suficiente.

3. ¿Qué función tiene el yodo en la tinción de Gram?

El Yodo entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. El Lugol es un compuesto formado por yodo en equilibrio con yoduro de potasio, el cual está presente para solubilizar el yodo, y actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana.

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