Taller – Microbiología

Taller – Microbiología

Leudin Cañizares Nieto

Ampliación de ADN con la reacción de cadena de la polimerasa

La clonación molecular permite producir y aislar grandes cantidades de un ADN en partícula. La reacción en cadena de la Polimerasa (PCR), fue desarrollada por Kary Mullis en el año de 1988. La PCR es un método de los muchos existentes, que permite obtener un sin número de fragmentos de material genético a partir de una única copia de ADN. La PCR puede conseguir una gran amplificación de del ADN por reacciones llevadas completamente in vitro, esto, siempre y cuando se conozca arte de la secuencia dela molécula de AND. Geoffrey M. Cooper y Robert E. Hausman. 2011.

La Dr. Laura Espinosa, afirma “La idea básica de la técnica es sintetizar muchas veces un pedazo o fragmento de ADN utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas”

Con cada replicación de la copia inicial se está incrementando de forma exponencial. Así una pequeña copia de ADN, sometida a 30 ciclos e amplificación da resultado de  de copias (Aproximadamente mil millones) por esta razón, peñas moléculas son ahora clonadas para ser fácilmente moléculas detectables de ADN, así mis pueden aislarse por clonación o analizarse directamente por digestión con edonucleasas de restricción o secuenciación de nucleótidos [pic 2]

Proceso de la PCR[pic 3]

[pic 4]

En la figura anterior se ve reflejado el proceso de amplificación del ADN por PCR, donde su secuencia es.

1. El material de inicio puede ser un fragmento de ADN clonado o una mezcla de moléculas de ADN.  La reacción empieza calentando el ADN diana a altas temperaturas (ej., 95 ºC) Esto permite la separación de las hebras.
2. Luego se desciende la temperatura para que los cebadores o primers se emparejen con sus secuencias complementarias en las hebras del ADN.

Esto se realiza la secuencia de nucleótidos que rodea dicha región para diseñar los primers que comiencen la síntesis de ADN en el punto deseado. Estos cebadores son habitualmente oligonucleótidos sintetizados químicamente compuestos de 15 a 20 bases de ADN.

1. El ADN de polimerasa Thermus aquaticus (Polimerasa Taq) se usan para formar nuevas hebras de ADN empezando en los cebadores, produciéndose la formación de dos nuevas moléculas de ADN.  
2. El proceso se repite las veces requeridas, obteniendo en cada ciclo de amplificación del doble de ADN

De acuerdo con el Dogma central, el material genético es el ADN, que es capaz de autorreplicarse, además de transcribirse a ARNm, que sirve a su vez de molde para la síntesis de proteínas. Dogma central ADN – ARN – PROTEINAS.

Ahora para entender mejor la Transcriptasa reversa o inversa es necesario entender un poco el funcionamiento de un Virus.

Los Virus y la Transcriptasa inversa (RT)

“Los virus están conformados por un único genoma ADN o ARN y recubiertos por una cápside proteica que sirve para su interacción con las células que deben infectar. Y se dice que debe infectarlas, puesto que estos microorganismos son in-tracelulares obligados, es decir, no son capaces de sobrevivir fuera de una célula, bien sea procariota o eucariota. Los virus que infectan las procariotas se denominan bacteriófagos. También existen virus cubiertos o envueltos y virus desnudos. Un virus envuelto es aquel cuya cápside proteica tiene una sobrecubierta lipídica, generalmente procedente de la célula infectada; por ende, un virus desnudo es un virus que carece de envoltura sobre su cápside”.  Gabriela D. Murcia. 2009. 

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