Veneno Alacran Azul

el veneno del alacrán azul, Rhopalurus junceus es actualmente comercializado con el nombre de Escozul. Este producto natural se emplea en el tratamiento de diferentes patologías, sin embargo en la literatura revisada no aparece información referente a la caracterización bioquímica del extracto de este ejemplar cubano. Objetivo: hacer una caracterización bioquímica preliminar del veneno crudo del alacrán cubano mediante el empleo de dos técnicas destinadas a estos fines. Método: se empleó la electroforesis discontinua de proteínas en gel de poliacrilamida al 15% y la cromatografía de alta presión. Resultados: se identificó un patrón difuso correspondiente a péptidos de talla inferiores a catorce KDa, mientras que por HPLC se determinaron trece picos en el veneno crudo de esta especie. Conclusiones: el veneno del alacrán azul presenta una composición molecular similar a la descrita para otras especies con una mezcla molecular inferior a catorce KDa.

El cáncer constituye una de las principales causas de muerte a nivel mundial. Datos preliminares del Anuario Estadístico del Ministerio de Salud Pública (MINSAP) indican que el cáncer cobró 17 490 vidas en Cuba en el año 2002, que equivale al 23% del total de muertes registradas en ese año.1

En el tratamiento de este grupo de enfermedades se utilizan tradicionalmente los fármacos citostáticos, las radiaciones y la cirugía; pero en la actualidad han surgido una serie de tratamientos alternativos que incluyen la terapia génica, elementos promotores de inmunogenicidad y otros que aceleran el proceso de apoptosis celular.2-4

El empleo terapéutico de la toxina del alacrán azul (Rhopalurus junceus) fue descubierto al cabo de una década de trabajo por el biólogo cubano Misael Bordier, quien inició el criadero de escorpiones y su investigación en la Facultad de Ciencias Médicas de Guantánamo a finales de los años 80 del siglo pasado. La toxina, una vez formulada y esterilizada constituye el producto natural Escozul. A la misma se le atribuyen propiedades antimicrobianas y antitumorales demostradas a través de algunos estudios preclínicos.3 El aislamiento y caracterización molecular de los extractos obtenidos de organismos y su evaluación farmacológica es un aspecto esencial del proceso de descubrimiento de la droga. Precisamente los avances en el área de las técnicas in vitro han trasformado sustancialmente esta faceta de la química de productos naturales.

En la literatura revisada no aparece información alguna sobre estudios que caractericen bioquímicamente el producto natural obtenido de esta especie de alacrán y comercializada con el nombre de Escozul.

A pesar de los resultados obtenidos en investigaciones preclínicas y clínicas mediante la administración de este veneno,7,8 las autoridades sanitarias cubanas no reconocen como evidencia científicamente documentada los reportes realizados hasta el momento, aunque las referencias sobre sus efectos y curas son sugerentes de una posible actividad y utilidad terapéutica.9 Partiendo de estos argumentos, se pretende caracterizar mediante métodos bioquímicos el extracto natural obtenido a partir de la estimulación eléctrica del apéndice terminal del alacrán azul.

MÉTODOS

Colección y preparación de la toxina

Se colectó el veneno de 50 alacranes de la especie Rhopalurus junceus en un volumen de 20ml de agua destilada, mediante la aplicación de corriente a baja intensidad en el apéndice terminal. Con la finalidad de concentrar la muestra se realizó una precipitación salina con NH4SO4 al 70%, seguidamente se resuspendió en 5ml de PBS 1X (137mM NaCl, 2.7mM KCl, 4.3mM Na4HPO4, 1.47mM KH4PO4) y se procedió a dializar durante 48h a 4ºC en PBS 1X. Se determinó la concentración de proteínas totales a través del método de Lowry.10 La toxina fue filtrada utilizando membranas de 0.2mm.

Caracterización bioquímica del veneno

En la caracterización bioquímica de las muestras se utilizaron dos métodos: electroforesis de proteínas y la cromatografía líquida de alta presión (HPLC), los que permitieron la estimación de su pureza, composición y peso molecular.

Electroforesis de Proteínas

Se realizó una electroforesis de proteínas discontinua empleando un gel de poliacrilamida al 15% en condiciones desnaturalizantes.10 Los marcadores de peso molecular utilizados fueron de 67, 43 y 14 KDa que se correspondieron con la albúmina bovina, ovoalbúmina y lisozima, respectivamente.

Cromatografía líquida de alta presión (HPLC)

Para la separación de las principales fracciones de proteínas y péptidos que conforman la mezcla del crudo de veneno, se utilizó un sistema de cromatografía de alta presión (HPLC), del inglés High Pressure Liquid Chromarography. (LKB Pharmacia, Suecia). Como matriz separadora se utilizó una columna analítica XK50/30, con 25ml de resina de intercambio iónico DEAE Sepharose Fast flow (Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Suecia), equilibrada con diez volúmenes de tampón PBS1X (pH 7.2).

La elusión se realizó con un gradiente creciente de molaridades de cloruro de sodio (NaCl) desde 0.1M hasta 1M de NaCl diluido en tampón PBS1X, pH 7.2. Las corridas se realizaron a un flujo de 0.8ml/min y una presión de 1.5 mPa, con un rango de absorbancia de 0.02. Se utilizó en las lecturas un UVICORD S2138. La velocidad del papel fue de 5mm/min. En cada corrida se aplicaron 80 µg totales del crudo diluidos en tampón fosfato (PBS 1X, pH 7.2).

RESULTADOS

Caracterización bioquímica del veneno La electroforesis de proteína desnaturalizante empleando gel de poliacrilamida al 15% permitió observar un patrón de bandas bien definidas en el

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