Very Large Hydrogen Atom in Interstellar Space

PRACTICA No. 2

Aislamiento y Caracterización de Staphylococcus sp

Introducción.

        El género Staphylococcus, miembro de la familia Micrococcaceae, comprende especies de gran importancia tanto en el aspecto clínico como en la industria alimentaria, entre los que destacan S. aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus, causantes de intoxicaciones, infecciones de la piel, vejiga y septicemias, entre otros problemas clínicos.

        Son microorganismos catalasa positivo, en forma de cocos gram positivos que se presentan agrupados en agregados irregulares o racimos, o bien formando pequeñas cadenas.

        Su crecimiento en medios sólidos está dado por colonias grandes, circulares y convexas que varían en coloración  desde blancas a amarillo naranja, debido a la presencia de pigmentos carotenoides excretados por algunos miembros del género.

        S. aureus, la especie tipo, produce una gran cantidad de productos extracelulares, entre los cuales se encuentran hemolisinas, coagulasa, leucocidina y enterotoxinas, que ayudan a la diferenciación entre especies.  Otra prueba bioquímica de suma importancia es la fermentación del manitol, la cual es positiva para S. aureus.

        En la industria alimentaria, es importante no solo el aislamiento e identificación de S. aureus de alimentos involucrados en problemas de intoxicación alimentaria, sino también, el poder determinar la presencia de la toxina, lo cual requiere de técnicas inmunológicas como el método de Outcherlony y la hemaglutinación, entre otros.

Procedimiento.

1. Hacer un frotis de la muestra proporcionada por el maestro de práctica y realizar una tinción al gram. Observar cuidadosamente.
2. Inocular la muestra en los siguientes medios de cultivo: Agar tripticasa soya, Staphylococcus 110 y/o agar sal manitol, Baird Parker y Vogel Johnson
3. Incubar por 24 – 48 horas, a 35 – 37 °C.
4. Observar las características coloniales en cada uno de estos medios.
5. Elegir una colonia típica de  cocos gram (+)  y realizar prueba de catalasa.
6. De la misma colonia tomar una muestra e inocular un tubo de BHI incubándolo por 18 horas.
7. Realizar la prueba de coagulasa, utilizando el cultivo de BHI.
8. Reportar los resultados obtenidos y el microorganismo aislado y/o identificarlo.  

Prueba de la catalasa.

1. Tomar una pequeña cantidad de microorganismos del centro de una colonia pura bien aislada y deposítela sobre un portaobjetos.
2. Agregue una gota de agua oxigenada al 30% sobre los microorganismos.
3. Observe  la inmediata aparición de burbujas, lo cual se considera como prueba positiva.

Nota:  No utilizar colonias de placas de agar sangre.

No invierta el orden de la técnica, porque pueden obtenerse falsos     positivos.

        No es necesario mezclar el microorganismo con el agua oxigenada.

 Prueba de la coagulasa.

1. Agregue 0.5 ml. De plasma de conejo a un tubo estéril de 13 x 100 mm.
2. Agregue 0.5 ml. De un cultivo puro de Staphylococcus sp. En BHI (18 horas).
3. Mezcle suavemente los contenidos para suspender el microorganismo. No agite.
4. Haga sus observaciones cada 30 minutos por espacio de 4 horas.
5. Incline ligeramente el tubo para observar la aparición del coágulo, lo cual se considera prueba positiva.

Actividades adicionales: (NO), atender lo dispuesto en la tabla enviada.

1. Investigar:

1. El fundamento selectivo y/o diferencial de los medios de cultivo comúnmente utilizados para aislar Staphylococcus sp. De muestras clínicas y alimentarias. Como lo son el ASM, Staphylococcus 110, Vogel y Johnson, Baird Parker, entre otros.
2. El fundamento bioquímico involucrado en la reacción de la catalasa, coagulasa y fermentación del manitol.
3. La diferencia fundamental que existe entre la prueba de coagulasa en porta y la de tubo.

1. Ilustre con un diagrama de flujo el procedimiento para aislar e identificar las especies de Staphylococcus más comunes.

PRACTICA No. 3

Aislamiento y Caracterización del género Streptococcus sp.

Introducción.

        El género Streptococcus, pertenece a la familia Streptococcaceae, la cual se caracteriza por ser cocos gram positivos agrupados usualmente en forma de cadenas, aisladas o en pares y por ser además anaerobios facultativos y grandes productores de ácido láctico.

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