MEDIO DE ENSAYO O BIOQUIMICAS

BIOQUIMICAS

OBJETIVO:

Que el alumno realice la siembra de medios de Ensaye y haga la interpretación (lectura) de los cambios observados en ellos después de la incubación.

INTRODUCCION:

Los medios de Ensaye o Bioquímicas son medios de cultivo de composición especial, que permiten conocer los productos metabólicos elaborados por, los microorganismos.

Las Bioquímicas permiten poner de manifiesto una o mas de las características fisiológicas de un microorganismo. El empleo de los medios de Ensaye es muy importante en la identificación de ciertos géneros y especies bacterianas y requiere especialmente de inoculos a partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio.

MATERIAL:

Asa bacteriológica (convencional y recta)

Capa bacteriana

Mechero de Bunsen

Gradilla

Masking tape

Medios de Ensaye:

SOLIDOS: Kliger o TSI, Citrato de Simmons.

SEMISOLIDO: MIO y/o Caldo Urea.

LIQUIDOS: Caldo Manitol y/o Caldo Urea.

CBT N° 1 “DR. LEOPOLDO RIO DE LA LOZA” CUARTO SEMESTRE

TEC. LABORATORISTA QUIMICO-CLINICO PRACTICA N° 9

ACTIVIDADES:

El profesor explicara y ara la demostración de la metodología para sembrar las Bioquímicas.

El alumno realizara las siembras de las Bioquímicas que se le proporcionen, etiquetándolas e incubándolas a la temperatura y tiempo indicado para cada una de ellas.

El alumno esquematizara en su manual, los posibles cambios que se presenten en las Bioquímicas, de acuerdo a las láminas expuestas en el laboratorio.

El alumno ara la lectura de los cambios que se observen en los medios de ensaye, basándose en la información que se anexa en este instructivo y en las láminas que para tal fin se expondrán en el laboratorio.

El alumno esquematizara en su manual los cambios que se observaron en las Bioquímicas.

BIOQUIMICAS: LECTURA Y ESQUEMAS

MEDIO TSI o KLIGLER

LECTURA

Lactosa positiva

Glucosa positiva

H2S positiva

Gas positiva

ESQUEMA

estría en superficie y picadura.

MEDIO CITRATO DE SIMMONS

LECTURA

Citrato negativo

ESQUEMA

Solo estría en la superficie.

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TEC. LABORATORISTA QUIMICO-CLINICO PRACTICA N° 9

MEDIOS DE ENSAYE O BIOQUIMICAS

AGAR CITRATO DE SIMMONS: Se utiliza para identificar las bacterias estéricas Gram - , basándose en la utilización del Citrato. Es un medio solido, de color verde. Puede usarse en placa o en tubo inclinado. Se siembra o inocula por estría en la superficie del medio. Los cultivos se incuban 4 días 35°C – 37°C.

Solo los microorganismos que utilizan el Citrato como única fuente de Carbono, crecen en el Agar Citrato de Simmons.

Interpretación de los cambios en el medio después de la inoculación e incubación:

La aparición de un crecimiento visible en la superficie del medio generalmente va acompañado de un cambio alcalino (azul) del indicador (azul de bromotimo) y se reporta como Citrato positivo.

Si no se observa crecimiento, ni cambio de color en el medio se reporta como Citrato negativo.

AGAR DE HIERRO DE KLIGLER: Se usa para la diferenciación de enterobacterias. Se basa en las propiedades de fermentar la glucosa y la lactosa junto con la formación de sulfuros. Contiene Lactosa, Dextrosa y como indicador de PH el rojo de Fenol. Es un medio solido de color rojo parduzco. Se usa en tubo inclinado. Se siembra o inocula por estría en la superficie inclinada y picadura. Se incuba 24 horas a 37°C.

En esta Bioquímica se puede obtener 4 lecturas:

1. Fermentación de Lactosa.

2. Fermentación de Glucosa.

3. Formación de Sulfuro de Hidrogeno (H2S).

4. Producción de gas.

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TEC. LABORATORISTA QUIMICO-CLINICO PRACTICA N° 9

Interpretación de los cambios en el medio después de la inoculación e incubación:

- Fondo amarillo - Fermentación de Glucosa, reporta como glucosa positiva.

- Superficie amarilla: Fermentación de Lactosa, se reporta como lactosa positiva.

- Aparición de zonas negruzcas en el medio:

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