Microscopia

MICROSCOPIO

EL microscopio permite observar elementos muy pequeños e invisibles a simple vista, con aumento de 25 a 1.500 veces, aproximadamente.

Tipos de Microscopio El Microscopio óptico simple: Constituido por una lente biconvexa única o lupa que hace converger los rayos luminosos que la atraviesan en un punto denominado foco y a una distancia focal muy corta.

El Microscopio óptico Compuesto: El microscopio se define como un instrumento óptico formado por un sistema de lentes: objetivos y oculares que amplían los objetos extremadamente pequeños para posibilitar su observación.

El Microscopio óptico Compuesto: componentes

A continuación se describen las partes que lo conforman:

Los objetivos: están localizados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metálica, denominada revólver o portaobjetivos, que permite cambiarlos fácilmente. Estos generan una imagen real, invertida y aumentada.

Los objetivos más frecuentes son los de 4X, 10X, 40X y 100X aumentos. Este último de 100x se llama de inmersión ya que para su utilización se necesita aplicar aceite de cedro sobre la preparación. El poder de aumento de cada objetivo se indica en el número grabado en la montura del lente.

Los oculares se denominan así porque están muy cercanos al ojo. Su función es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. El poder de aumento del ocular se encuentra marcado en la montura del ocular.

El tubo óptico: es una cámara oscura unida mediante una cremallera al brazo del microscopio. Tiene el revólver con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.

El Brazo: es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie con el tubo.

Platina

Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo.

Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un carro con un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento que permite mover la preparación de delante hacia atrás o de izquierda a derecha y viceversa.

El condensador: es un sistema de lentes convergentes situadas bajo la platina, su función es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminación hacia la preparación.

Diafragma-iris Esta formada por un conjunto de laminillas metálicas concéntricas que limitan un espacio cuyo diámetro se puede regular con una palanca lateral y permite graduar la cantidad de luz que entra en el condensador, eliminando los rayos demasiado desviados. Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador.

Tornillo Macrométrico: Se encuentra en la parte inferior del microscopio de los nuevos microscopios. Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina moviéndola de arriba hacia abajo y viceversa. Permite un enfoque aproximado o grueso de la muestra

Tornillo Micrométrico: Generalmente se encuentra incorporado al tornillo macrométrico. Sirve para dar claridad a la imagen al lograr un ajuste fino y preciso, mediante movimientos de la platina. Ambos tornillos llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.

La fuente de iluminación: se trata de una lámpara halógena de intensidad graduable. Esta situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualización.

Pie o base: sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al aparato. En el se integra la fuente luminosa.

Poderes del microscopio

Poder de aumento: Permite magnificar la imagen. Corresponde al aumento (A) dado por la relación: Tamaño de la imagen / tamaño del objeto. La ampliación es igual al producto del aumento del lente ocular por el del objetivo. Cada objetivo y cada ocular tienen grabado el número de veces que aumentan la imagen. Si la imagen del objeto, se hace aumentar 40 veces mediante el objetivo y enseguida 10 mediante el ocular, su aumento total será 10X40= 400

Poder de penetración o profundidad: Permite visualizar los diferentes planos de una preparación y está dado por el ajuste de precisión que se logra con el tornillo micrométrico.

Poder de resolución es la capacidad de presentar dos puntos que se encuentran muy cercanos entre sí como separados, lo cual permite observar detalles de los objetos que con el ojo humano no se podrían ver. El ojo humano no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro. Con el Microscopio óptico, el poder separador máximo es de 0,2 décimas de micra. Mejora la visión unas 500 veces con relación a la del ojo humano

diferentes poderes de penetración. Poder de definición Es la capacidad del microscopio para formar imágenes nítidas y con contornos definidos. Depende de la corrección de las aberraciones (o defectos) de las lentes de oculares y objetivos.

El poder de resolución depende de la longitud de onda ( λ ) y de la apertura numérica del objetivo (A.N.) El límite de resolución se calcula con la siguiente fórmula:

λ/2xA.N.

El Poder de Resolución está dado por la siguiente reilación:

A.N./ λ A.N: relaciona el ángulo de apertura de los rayos de luz, que provienen de la muestra, con el índice de refracción.

Principios generales de microscopía

Principios ópticos

Una lente sencilla (biconvexa) posee dos focos, uno a cada lado de la lente (F y F´). Cuando los rayos luminosos pasan a través de la lente se concentran en el foco. La distancia focal es la distancia entre el centro de la lente y el punto en donde convergen los rayos.

La distancia focal de una lente depende del índice de refracción del material del cual está hecha, y del medio que envuelve la lente. Por eso, es diferente la distancia focal de una lente en el agua, que esta misma en el aire. Como también es diferente la distancia focal de una lente de vidrio en comparación con una construida en plástico.

Cuanto más pequeña es la distancia focal de una lente tanto mayor es su aumento. Si el objeto

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