Extraccion De RNA

HIPÓTESIS.

El alumno adquirirá conocimiento acerca de la extracción de ARN teniendo como base los conocimientos adquiridos en la parte teórica de la materia.

OBJETIVO.

Que el alumno desarrolle la habilidad para la extracción del RNA total partir de Liofilizado de Saccharomyces boulardii (Floratil®)

INTRODUCCIÓN.

En los organismos celulares el ARN es la molécula encargada de dirigir la síntesis de proteínas, pues aunque el ADN es el que contiene la información que determina la estructura de estas, no puede actuar solo y se vale del ARN para traducir esta información y producir las proteínas necesarias para el desarrollo y actividades de la célula.

El azúcar presente en el RNA es la ribosa. Esto indica que en la posición 2' del anillo del azúcar hay un grupo hidroxilo (OH) libre. Por este motivo, el RNA es químicamente inestable, de forma que en una disolución acuosa se hidroliza fácilmente.

El RNA es la única molécula biológica con capacidad informativa y actividad enzimática. Las células contienen distintos tipos de RNA que juegan papeles específicos en la fisiología celular: El mRNA y el tRNA son intermediarios en la transmisión de la información genética en la célula; el rRNA juega un importantísimo papel en la traducción del mensaje genético como componente fundamental del ribosoma; otros RNAs con actividad catalítica (ribozimas) participan en distintas funciones celulares y finalmente, los sRNAs (small RNAs) son moléculas pequeñas descubiertas recientemente que participan en la regulación de la expresión génica.

Fundamento:

El ARN de levadura se obtiene extrayendo un homogenizado de células con fenol. La solución concentrada de fenol rompe los enlaces de hidrógeno en las macromoléculas, causando desnaturalización de las proteínas. La suspensión turbia se centrifuga y aparecen dos fases: la fase inferior de fenol contiene ADN y la fase superior acuosa contiene glúcidos y ARN. La proteína desnaturalizada se halla presente en ambas fases y puede removerse por centrifugación. El ARN precipita luego con etanol. El producto obtenido no contiene ADN pero generalmente está contaminado con polisacárido que se puede tratar con amilasa para mejorar la purificación.

PROCEDIMEINTO.

RESULTADOS.

P= A260/(A280 )=>1.70

Eq.2

P= 0.100/0.059=1.69

Eq. 4

P= 0.150/0.094=1.59

DISCUSION DE RESULTADOS.

Tiocianato de guanidinio: compuesto químico utilizado como degradante de proteínas en general.

Cloroformo- alcohol- isoamílico: precipitación de preoteínas.

Isopropanol: precipita el RNA.

Etanol: purifica el ARN.

Fenol ácido pH 4.5: purificación de RNA.

Absorbancias:

De acuerdo a los

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