Proteina

El termino proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus Mulder, en 1838 , tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS , que significa primordial nivel primario .Las proteínas son un grupo de biopolímeros constituidos de aminoácidos que exhiben una amplia gama de estructuras y funciones .Las proteínas como un grupo de biomoleculas , desempeñan una gran variedad de funciones , algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan moléculas pequeñas.

PROTEINAS

METODO DE PREPARACION.

METODO DE BIURET

Material por equipo

• 1 proveta de 50ml.

• 2 gradillas

• 2 pipetas de 10ml

• 3 pipetas de 5ml

• 1 pipeta de1ml

• tuvos de15x100-12 piezas

• 1 vaso de presipitados de 100 ml

• 12 tubos de 16x150

• 1 balanza granataria

• papel parafilm para 10 tubos

• papel embudo y un filtro

REACTIVOS POR EQUIPO

• Agua destilada

• Solucion de acido acetico 0.1 N

• Solucion de Acetato de sodio 0.1 N

• Solucion de caseina (contenido 4 mg/ml)

• Reactivo de Biyret 50ml

MATERIAL TRAIDO POR EQUIPO:

• 6 gramos aprox. De leche en polvo descremada

• 1 plumon indeleble

• masking tape

• javon y franela para limpiar

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELECTRICO

En la preparación de tubos con solucion amortiguadora de acetatos en la grailla se colocaron 6 tubos de 15x100 rotulados con numeros consecutivos , se adiciono a caadad tubo las soluciones de acido acetico y acetato de sodio con el siguiente orden :

TUBO SOLUCION DE ACIDO SOLUCION ACETATO DE

ACETICO 10.1 N SODIO 0.1N

1 5ml -

2 4 ml 1 ml

3 3ml 2ml

4 2ml 3ml

5 1ml 4ml

6 - 5ml

el volumen de cada tubo deberá de ser de 5 ml 1:30

PREPARACIÓN DE LA LECHE

En un vaso de precipitados de 100 ml se disolvieron 6 gr de leche en polvo descremada con 50 ml de agua destilada incorporándola poco a poco para que no se formaran grumos .

En un tuvo de ensaye de 16x150 mm se midio 2ml de leche reidratada y añadimos 8ml de agua destilada agitando cuidadosamente por inversión. 1:5

PUNTO ISOELECTRICO

Añadimos 1 ml de leche diluida (1:5) a cada tubo de la solución amortiguadora , después mezclamos cuidadosamente todos los tubos y dejamos reposar por 10 minutos .

En el tubo 1 donde observamos los grumos de leche suspendidos en la solución se solubilizaron las proteínas de leche

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

Después se separo el sobrante y se transfirió a los tubos limpios de 15x100 rotulados con el numero de tubo que le correspondia.

• Tubo 1: CLARO

• Tubo 2 : CLARO CON SOBRENADANTE

• Tubo 3: CLARO CON SOBRENADANTE

• Tubo 4: CLARO CON SOBRENADANTE

• Tubo 5: TURBIO

• Tubo 6: TURBIO

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS CON EL METODO DE BIURET

Se colocaron en una gradilla 11 tubos de 16x150 mm, rotulando a un tubo con el numero cero el cual llevo los reactivos para calibrar el espectrofotometro , los siguientes 4 tubos los rotulamos de I al IV , y los restante los rotulamos de 1 al 6.

Se añadio a cada tubo de reactivos para determinar las proteinas en la curva de calibración (I IV) y los sobrenadantes en los tubos del 1 al 6 .

Mezclamos cuidadosamente cadad reactivo y los dejamos en reposo por 30minutos para favorecer el color .

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

AZUL AZUL Y MORADO AZUL AZUL AZUL AZUL

TUBO I TUBO II TUBO III TUBO IV TUBO V TUBO VI

AZUL CLARO INTERMEDIO MORADO MORADO MORADO MORADO

RESULTADOS

En la siguente tabla estan los resultados que obtuvimos de absorvancia o densidad optica.

TUBO I II III IV V 1 2 3 4 5 6

D.O 0.32 0.60 0.093 0.127 0.152 0.17 0.020 0.008 0.008 0.19 0.23

MG. DE PROTEINA 0.8 1.6 2.4 3.2 4 0 0.12 0.037 0.076 0.12

• Calcula el contenido proteico de los tubos I al IV deacuerdo al volumen empleado de la solucion en estandar de caseina y colocalos en el eje x.

• Coloca los valores O.D obtenidos para cada uno de estos tubos en el eje y y traza la curva correspondiente.

• Interpola los valores de O.D de los tubos 1-6 , calcula la cantdad de proteina precente en cada sobre nadante

TABLA DE RESULTADOS.

PROTEINA Mg/ ml Mg/ 100 ml

Sobrenadante1 5.1 510

Sobrenadante2 0.6 60

Sobrenadante3 0.24 24

Sobrenadante4 0.24 24

Sobrenadante5 0.57 57

Sobrenadante6 6.9 690

• haciendo uso de la ecuación de HEENDERSON HASELBACH calcula el pH del tubo de donde observaste la mayor precipitación de caseína.

0.4 mg proteina x 5x6x2 =24 mg proteina/ml

6g 1000 ml =120 g leche

30 ml 1 L L

2 ml + 8 ag

1 ml +5 = 6 ml 0.5+0.5 = 1 ml

24 g proteina

L = 0.2 g proteina

120 g leche g de leche

PROTEINAS.

CLASIFICACION.

1.- Basada en la forma de las proteínas:

a) Proteínas globulares (esferoproteinas):

Estas proteínas no forman agregados. Las conformaciones principales del esqueleto

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