Acta Medica Peruana

Acta Médica Peruana

versión On-line ISSN 1728-5917

Acta méd. peruana v.28 n.1 Lima ene./mar. 2011

Artículo original

Patrones de coloración en la inmunofluorescencia indirecta y su utilidad en el diagnóstico de leishmaniasis tegumentaria y enfermedad de Chagas

Indirect immunofluorescence staining patterns and their use for diagnosing cutaneous leishmaniasis and Chagas’ disease

Luis Vásquez Huerta1, Nancy Ruelas Llerena2, Eleazar Córdova Benzaquen3

1 Médico parasitólogo. Docente de la Facultad de Medicina UNSA y UCSM.

2 Biólogo. Docente de la Facultad de Medicina UNSA y UCSM

3 Biólogo. Docente de la Facultad de Medicina UNSA

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RESUMEN

Objetivo: Determinar el valor diagnóstico de la Inmunofluorescencia indirecta (IFI) en el diagnóstico de leishmaniasis y enfermedad de Chagas.

Material y método: La inmunofluorescencia indirecta (IFI) fue aplicada para el diagnóstico de leishmaniasis y la enfermedad de Chagas utilizando como sustrato antigénico epimastigotos de Trypanosoma cruzi. Se descubrió un patrón de fluorescencia nuclear con los sueros de pacientes con leishmaniasis y un patrón periférico para con los de la enfermedad de Chagas. Luego, en un estudio ciego, se estimó el valor diagnóstico de la IFI en ambas enfermedades.

Resultados: En el diagnóstico de Leishmaniasis se encontró: Sensibilidad: 84,2%, especificidad: 100%, valor predictivo positivo: 100%, valor predictivo negativo: 82,9% y exactitud: 91,0%.

Conclusiones: La técnica de Inmunofluorescencia utilizando epimastigotos de Trypanosoma cruzi y considerando los patrones de coloración propuestos, tiene utilidad en el diagnóstico de leishmaniasis tegumentaria y también en el diagnóstico de la infección chagásica evitando la confusión dada por la reacción inmune cruzada de estas enfermedades.

Palabras clave: Leishmaniasis, enfermedad de Chagas, inmunodiagnóstico. Leishmania braziliensis. Trypanosoma cruzi.

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ABSTRACT

Objective: To determine the value of indirect immunofluorescence (IFI) in the diagnosis of leishmaniasis and Chagas disease.

Material and method: Indirect immunofluorescence (IFI) was employed for diagnosing leishmaniasis and Chagas disease using Trypanosoma cruzi epimastigota as substrate antigens. A nuclear fluorescence pattern was found in sera from patients with leishmaniasis, and a peripheral pattern was found in those with Chagas disease. Afterwards, we estimated the diagnostic value of IFI for both diseases in a blinded fashion.

Results: For diagnosing leishmaniasis, IFI sensitivity was 84.2%, specificity, 100%, positive predictive value, 100%, negative predictive value 82.9%, and accuracy was 91.0%.

Conclusions: The immunofluorescence technique using Trypanosoma cruzi epimastigota, considering the proposed color patterns, is useful for diagnosing cutaneous leishmaniasis and T. cruzi infection by avoiding confusion because of immune cross-reactivity between these conditions.

Key words: Leishmaniasis, Chagas disease, immunologic tests, Leishmania braziliensis. Trypanosoma cruzi.

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INTRODUCCIÓN

La inmunofluorescencia indirecta (IFI) es una técnica de muy buena sensibilidad y especificidad diagnóstica5,6 y relativamente de bajo costo debido principalmente a que el sustrato antigénico puede ser preparado en cualquier laboratorio de mediana complejidad. Esta técnica es utilizada para el diagnóstico de varias enfermedades; nosotros empleamos esta técnica para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas y Leishmaniasis, enfermedades frecuentes en la consulta, la primera propia de la zona y la segunda propia de zonas tropicales pero que los afectados acuden a nuestra ciudad para diagnóstico y tratamiento.

En la literatura especializada se encontró que no se recomienda el uso de la IFI cuando coexisten la enfermedad de Chagas y la Leishmaniasis4,18, 22 en razón a que la IFI presenta reacción cruzada para estas dos enfermedades, condición que reduce notablemente su especificidad y por lo tanto su valor predictivo positivo. La lectura de IFI en sueros de pacientes chagásicos, hechas con frecuencia en el laboratorio de Parasitología, Universidad Nacional de San Agustín de Arequipa y la necesidad de hacer el diagnóstico de leishmaniasis usando como antígeno epimastigotes de Trypanosoma cruzi por no contar con cepas de Leishmania, nos ha permitido visualizar diferencias en cuanto a la localización de la fluorescencia en el parásito, según se trate de sueros de pacientes con infección chagásica o leishmaniásica utilizando como antígeno los epimastigotes de T. cruzi en ambos casos; por lo que fue necesario establecer patrones de coloración para cada enfermedad, ya que este conocimiento no está reportado en la bibliografía y puede ser de mucha ayuda en laboratorios que no cuentan con todos los recursos como el nuestro. Además, el cultivo de T. cruzi es relativamente fácil en comparación con el cultivo de Leishmania peruviana o L. braziliensis.

MATERIAL Y MÉTODOS

Se trabajó 29 sueros de infectados con T. cruzi diagnosticados mediante dos o más pruebas serológicas positivas (IFI, ELISA, HAI); algunos sueros de pacientes con xenodiagnóstico positivo. Así mismo, se utilizó 39 sueros de pacientes con Leihmaniasis tanto selvática como andina diagnosticados clínicamente y mediante biopsia de lesión cutánea y/o mucosa utilizando improntas de dicha biopsia y coloreándolas con Giemsa.

Como antígeno se utilizó epimastigotos de T. cruzi fijados en láminas portaobjetos21 (improntas), provenientes de medio de cultivo bifásico: el medio NNN (Nicolle, Novy, Mc Neal) como fase sólida y el medio MEM (Minimal Essential Medium), suplementado con suero de conejo inactivado a 56°C por 30 minutos, además antibióticos y antimicóticos. De un cultivo de 7 días de incubación se retiran los parásitos con solución salina formolada1. Se filtran, se centrifuga. Se decanta y el pellet se lava dos veces con solución salina estabilizadora (SSE). Se suspende en SSE colocándose de 10 a 15 parásitos (25 μl) por campo de 400X en cada pocillo de láminas portaobjetos. Se secan las improntas por medio de aire caliente y luego se fija flameándola. Se lavan los portaobjetos con agua destilada, se secan con aire frío y se fija nuevamente a la llama. Como conjugado se utilizó antigamaglobulina humana de conejo unida a tiocianato de fluoresceína (Sigma20) a una dilución de 1:20.

Se calculó la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo y exactitud con sus respectivos intervalos de confianza(IC) al 95 %. El cálculo del

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