Aminoacidos

ENZIMAS Y CINÉTICA ENZIMÁTICAS

Rozo Guzman Kathering

Zeng zhu weiwen

RESUMEN

Los resultados obtenidos demostraron que la velocidad enzimática se ve influenciada por la cantidad de enzima presente en solución. La gráfica que se produce como consecuencia de la aparición de eritrodextrinas del almidón genera una recta de pendiente positiva, lo cual permite pensar que a medida que la concentración de la enzima es mayor el tiempo que se necesita para transformar el sustrato en producto es mucho menor (al graficar 1/t vs concentración).Estos últimos resultados son consistentes por el hecho que las enzimas son catalizadores biológicos de una reacción. Así mismo se demostró que la temperatura tiene un efecto importante en la velocidad enzimática. Si la temperatura aumenta considerablemente la reacción puede no producirse debido a la desnaturalización de la enzima. Si la temperatura es alta y propicia se obtienen los productos de la acción enzimática sobre el sustrato.

ABSTRACT

The results showed that the enzyme rate is influenced by the amount of enzyme present in solution. The graph is a result of the appearance of starch eritrodextrinas generates a positively sloped straight, which suggests that as the concentration of the enzyme is increased the time required to convert the substrate to product is much lower (by plotting 1 / t vs concentration). latter results are consistent in that enzymes are biological catalysts of a reaction. Also it was shown that temperature has a major effect on the enzymatic rate. If the temperature increases considerably the reaction may not occur due to enzyme denaturation. If the temperature is high and the product facilitates the enzymatic action on the substrate is obtained.

INTRODUCCION

Las enzimas son macromoléculas, específicamente proteínas, que tienen la propiedad de catalizarlas reacciones bioquímicas. Pero las condiciones en las cuales se realice dicha catálisis afectarán la eficiencia de la reacción por lo tanto estas se deben de controlar en todo momento. Por ejemplo son muy importantes los factores como la concentración del enzima, la temperatura y el pH. Por ejemplo si la temperatura es muy elevada, el enzima se desnaturaliza y queda inactiva; si la temperatura es muy baja, el enzima no se desnaturaliza, pero igual queda inactiva. Mientras que valores de pH extremos pueden desnaturalizar a los enzimas. Los enzimas, también se caracterizan por tener un alto grados de especificidad, es decir sólo actúan para un solo tipo de sustrato. Esto puede deberse a la relación estereoquímica entre el sustrato y el enzima, así como también al tipo de grupos funcionales que del sustrato. [1]

Hay factores que afectan la actividad enzimática:

• Concentración del reactivo: A mayor concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción.

• Concentración de la enzima: Siempre y cuando haya reactivo disponible, un aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite.

• Temperatura: Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las proteínas.

METODOLOGIA

Obtención de a-amilasa salival:Se preparó un tubo de ensayo sobre el cual se colocó un embudo con un papel de filtro plegado. Este filtro se humedeció con suero fisiológico (agua con NaCl al 0,9%) hasta la adaptación del embudo y aparición del filtrado. Tras enjuagar la boca, se mastico un trozo de papel de filtro para estimular la salivación. Se depositó, sobre un tubo de ensayo y se añadió 12 ml de suero para diluir la secreción y permitir la filtración de la a-amilasa. Se dejó unos minutos el tubo con el embudo en la gradilla hasta recoger el filtrado, que fue nuestra fuente de enzima. Antes de utilizarlo, se agito el tubo para obtener una solución homogénea.

Obtención de la cantidad adecuada de a-amilasa: En cinco tubos de ensayos, marcados como 1, 2, 3, 4 y 5, se pipeteó las cantidades de reactivos indicadas (en ml) que se especifican a continuación:

• Añadimos la a-amilasa lo más rápidamente posible, Agitamos los tubos hasta homogeneizar la mezcla de almidón y amilasa, e incubar a 37ºC definidas, contado desde el momento en que se acaba la agitación tras la adición de la enzima. Cronometrábamos el tiempo en que cambia el color azul y el color violeta.

• Se repitió el ensayo a temperatura ambiente y en baño María invertido (agua con hielo) tenemos en cuenta la temperatura de cada ensayo.

Prueba del yodo o del lugol: permitió identificar la presencia de almidón, la cual con este reactivo da un color azul-violeta característico.

RESULTADOS Y ANALISIS

• Montajes: Hidrolisis de almidón

Tubos

reactivos 1 2 3 4 5

ml solución buffer 2 1,9 1,5 1 0

ml de amilasa 0 0,1 0,5 1 2

Grupo 1- kathering y wei

Temperatura 25°c

Almidón 5ml

Lugol 3 gotas

HCl 1ml

Grupo 2- Laura Sánchez

Temperatura 5°c

Almidón 5ml

Lugol 3 gotas

HCl 0ml

Grupo 3- Santiago-óscar

Temperatura 5°c

Almidón 5ml

Lugol 3 gotas

HCl 1ml

• Resultados

Hidrolisis del almidón

Grupo 1

Tubo 1: azul, no fue hidrolizado

Tubo 2, 3, 4: amarillo a los 9 minutos

Tubo 5: amarillo a los 7 minutos

Grupo 2 y 3

Tubo 1: azul, no fue hidrolizado

Tubo 2, 3, 4: azul, no fue hidrolizado

Tubo 5: amarillo a los 9 minutos

Tabla 1. Titulación de la muestra con enzima de fruta

Tiempo

Reactivo 15 minutos 30 minutos 45 minutos 60 minutos

Solución de pectina 2ml 2ml 2ml 2ml

Solución de extracto 2ml 2ml 2ml 2ml

pH

ml de NaOH 0,0004 1,8ml 1,8ml 1,8ml 1,8ml

Tabla 2.Titulación de la muestra con enzima industrial

Tiempo

Reactivo

15 minutos

30 minutos

45 minutos

60 minutos

Solución de pectina 2ml 2ml 2ml 2ml

Solución de extracto 2ml 2ml 2ml 2ml

pH

mL de NaOH 0,0004 2ml

1,9ml

1,5ml 2ml 2,5ml

2,7ml 2,8ml

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