Cinetica Enzimatica

CROMATOGRAFIA DE PAPEL

INTRODUCCION

La palabra cromatografía significa gráfica de colores y fue diseñada por Michael Tswett en el 1903. Tswett llevó a cabo una extracción de una mezcla de pigmentos de hojas verdes y luego pasó este extracto a través de un tubo de vidrio empacado con carbonato de calcio; de esta forma logró separar los pigmentos presentes en las hojas.

Actualmente cromatografía es el nombre que se le da a un grupo de técnicas utilizadas en la determinación de la identidad de sustancias, en la separación de componentes de las mezclas y en la purificación de compuestos. Esta técnica es muy efectiva y por lo tanto se utiliza tanto a nivel de investigación como a nivel industrial.

Este método puede variar de técnica en técnica, pero siempre se basa en el mismo principio: Todos los sistemas de cromatografía contienen una fase estacionaria y una fase móvil.

OBJETIVOS

*Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.

*Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase estacionaria.

*Analizar la influencia del solvente en la separación cromatografía.

*Observar las diferentes características de la placa en la cromatografía.

MARCO TEORICO

En toda separación cromatográfica hay una fase estacionaria y una fase móvil.

La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma posición. La fase móvil puede ser un líquido o un gas que corre a través de una superficie y de la fase estacionaria. Las sustancias que están en un sistema de cromatografía interaccionan tanto con la fase estacionaria como con la fase móvil. La naturaleza de estas interacciones depende de las propiedades de las sustancias así como también de la composición de la fase estacionaria.

La rapidez con que viaja una sustancia a través del sistema de cromatografía depende directamente de la interacción relativa entre las sustancias y las fases móvil y estacionaria. En el caso de una mezcla, si cada componente interacciona diferente con la fase móvil y la fase estacionaria, cada uno de ellos se moverá diferente.

En la siguiente tabla se observan diferentes fases móviles y fases estacionarias en diferentes técnicas de cromatografía:

Técnica Fase móvil Fase estacionaria

Cromatografía de gases Gas Sólido o líquido

Cromatografía líquida

en fase inversa Líquido (polar) Sólido o líquido

(menos polar)

Cromatografía líquida

en fase normal Líquido

(menos polar) Sólido o líquido

(polar)

Cromatografía líquida

de intercambio iónico Líquido (polar) Sólido

Cromatografía líquida

de exclusión Líquido Sólido

Cromatografía líquida

de adsorción Líquido Sólido

Cromatografía de

fluidos supercríticos Líquido Sólido

En la cromatografía se tiene en cuenta la velocidad del soluto y la del eluente para pode determinar la siguiente relación.

Rf = Velocidad de movimiento del soluto

Velocidad de movimiento del eluente

A continuación se describirán las diferentes técnicas de cromatografía:

Cromatografía de papel: es un proceso donde el absorbente lo constituye un papel de Filtro. Una vez corrido el disolvente se retira el papel y se deja secar, se trata con un reactivo químico con el fin de poder revelar las manchas.

Cromatografía de capa fina: basa en el principio del reparto entre dos fases. En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio la fase móvil que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para eluír a las moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan diferente coeficiente, la fase móvil a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente solubles en la fase estacionaria.

Cromatografía de columna: Los elementos básicos en la cromatografía de columna son una son la fase estacionaria y la fase móvil. La fase estacionaria la forma un sólido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plástico o vidrió.

La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solución que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva solución que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.

La Cromatografía en columna se emplea para la separación de sustancias en escala preparativa.

Cromatografía gaseosa: La muestra es vaporizada e introducida en un flujo de un gas apropiado denominado de fase móvil o gas de arrastre. Este flujo de gas con la muestra vaporizada pasa por un tubo conteniendo la fase estacionaria, donde ocurre la separación de la mezcla. La fase estacionaria puede ser un sólido adsorbente o, más comúnmente, una película de un líquido poco volátil, soportado sobre un sólido inerte o sobre la propia pared del tubo. Las sustancias separadas salen de la columna disueltas en el gas de arrastre y pasan por un detector; dispositivo que genera una señal eléctrica proporcional a la cantidad del material eluido.

La Cromatografía Gaseosa es una técnica utilizada para la separación y análisis de mezclas de sustancias volátiles.

MATERIALES Y EQUIPO

1 CROMATOTANQUE

8 VASOS DE PRECIPITADO DE 50 ML

1 VASO DE PRECIPITADO DE 500 ML

1 PROBETA DE 50 ML

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