Analisis Fraccionamiento Celular

Análisis de fraccionamiento celular

Para estudiar la células de espinaca primero rompimos con el método de homogenización y posteriormente aislamos empleando centrifugación

La homogenización de espinaca fue realizada con mortero el cual resulta muy eficaz ya que se utiliza en tejidos duros por la fricción mecánica que produce el pistilo por la fuerza ejercida sobre el tejido rompiéndolo y sobre la pared y membrana celular liberando asi todo el contenido celular de la espinaca . Para poder disgregar es necesario controlar las condiciones debido a que las células son lábiles , frágiles y termolábiles usando una solución que se trato de buffer que evito cambios en su pH ya que el ph de la espinaca es de 7.1 y el de el pbs es de 7.2 manteniendo asi su concentración isotónica , mediante el enfriamiento de material y solución detenemos el proceso enzimático que podría afectar a la espinaca , y hubo uso de un abrasivo que fue azúcar sin refinar que poseer una dureza superior a la espinaca. Esto es con el fin de remover sin sufrir desgastes excesivos en su estructura , con el fin de un mejor triturado , al terminar filtramos para retirar el abrasivo que podría resultar ser una impureza

Centrifugamos el homogenizado a 2500 rpm por 10 minutos separamos el sobrenadante y volvimos a centrifugar ahora a 3500 rpm por 15 minutos , de ambos solo tomamos los sedimentos que posterior mente marcamos como A y B , sedimentamos partículas conforme a su peso molecular , esto se debe a la velocidad de giro formando una acumulación en el fondo que tienden a hundirse por tener una densidad menor que la del medio en que se encuentra. La primera centrifugación de 2500 rpm poe 10 min se considera como suave ya que fue tiempo y poco fuerza de aceleración) en esta sedimentamos las partículas mayores y/o más densas como son los nucleos , células enteras y pared celular . Cuando el sobrenadante de la primera centrifugación es centrifugado de nuevo en condiciones de mas tiempo y más fuerza de aceleración (3500 rpm por 15 minutos )sedimentan de nuevo las partículas más densas presentes que ahora serán mitocondrias , cloroplastos , vacuolas

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