Fraccionamiento Celular

¿Qué es y cuál es el objetivo del fraccionamiento celular, la homogeneización y la centrifugación diferencial?

Fraccionamiento Celular: Es una técnica de laboratorio, tras la disgregación, en la que se intenta reagrupar las partículas, generalmente células u orgánulos celulares, de modo que, sus funciones individuales puedan ser estudiadas.

Homogeneización: El fraccionamiento celular comienza con la homogeneización, o sea la ruptura de la célula. El objetivo es romper las células sin dañar severamente sus organelos.

Centrifugación diferencial: La centrifugación diferencial es un proceso de separación que puede separar los componentes celulares por centrifugación repetida, a velocidades cada vez mayores. En estas condiciones, los componentes de la célula se separan en función de su tamaño y densidad: los componentes de gran tamaño y más densos migran más rápidamente hasta el fondo a velocidades relativamente bajas y forman un sedimento.

Conversion :

G=1.12 x R x (RPM/1000)^2 donde R: radio en milímetros del centro del rotor a la base de la camisa de forma horizontal.

¿Qué soluciones pueden utilizarse en la homogeneización química, cuales son las ventajas y desventajas de cada uno de ellos?

Se utilizan sustancias que puedan dañar directamente a la pared celular, como:

Solventes Orgánicos:

V= Disuelve lípidos (que forman la pared celular) y la desestabilizan, es barato.

D= Causa un stress moderado en la celula.

Detergentes:

V=Disuelve la membrana celular, por lo que la solubiliza, además de causar un stress suave a la celula.

D=En cuanto a costos es moderadamente caro.

Alcalis:

V=Solubilizacion de la membrana por saponificación de los lípidos que la componen, además de ser barato.

D=No es muy recomenble el uso de este método ya que causa un stress muy fuerte en la celula.

Agua (Shock osmótico):

V=Roptura omotica de la membrana, causa un stress muy suave a la celula y es barato.

¿En la centrifugación diferencial se obtienen fracciones puras? Fundamenta tu respuesta.

No, debido a que en el pellet han quedado los organelos intactos, mientras que en el sobrenadante esta una mezcla de fracciones de organelos, para poder aislar cada uno de los organelos se es necesario el uso de diferentes tiempos, rpm y temperatura (frio) para poder separar cada uno.

¿Qué otras técnicas adicionales pueden utilizarse para mejorar la purificación de organelos celulares? Fundamenta tu respuesta.

detergentes: SDS- sulfato dodecil de sodio

Enzimáticos: como la lisozima, la proteinasa K,

triton

EDTA

Estos tienen la ventaja de ser mucho más específicos sobre todo para las paredes celulares

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