Fraccionamiento celular.

INTRODUCCION:

               A diferencia de las células procariotas, las células eucariotas poseen un núcleo que contiene la mayoría de ADN envuelto en una membrana. Dejando así el material genético separado del resto de los contenidos de la célula o el citoplasma, en esta se pueden distinguir diversos organelos, como el citoplasma, el retículo endoplásmico, el aparato de Golgi, lisosomas, peroxisomas, ribosomas, citoesquletos, etc. Los cuales tienen diferentes funciones dentro de la célula.

Un tejido puede ser separado en las células que lo componen con técnicas específicas, una de las técnicas más común y utilizada es el Fraccionamiento celular, que es usado para investigar la bioquímica y fisiología de organelos fuera del ambiente complejo de la célula intacta, permitiendo así obtener componentes aislados con alto grado de pureza. Esta técnica fue desarrollada por Alberte Claude y Christian Duve en 1940 y 1950

MARCO TEORICO:

Fraccionamiento celular:

    Es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas, que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, ya sea éste un orgánulo (mitocondrias, núcleos, peroxisomas, etc.) una fracción de membrana (membrana total, plasmática, dominio baso lateral, dominio apical, etc.), complejos multiproteicos (citoesqueleto de actina, microtúbulos, poros nucleares, etc.)

Etapas:

1. Homogenizado: Para preparar los tejidos para el fraccionamiento celular, primero se debe suspender en un medio apropiado, para mantener la integridad de los organelos y enzimas durante el procedimiento de la fracción, todas las soluciones y cristalería debe mantenerse frías. procedimiento que rompe los enlaces celulares y libera el contenido celular, sin dañar el medio en suspensión. Esto puede ser por un medio mecánico( mortero, pinzas, ultrasonidos, etc.) y por un medio químico (detergentes, enzimas, shock osmótico) dando un lisado celular.

1. Filtrado: Las células se homogeneizan siempre en una solución tamponada la cual ayuda a estabilizar el pH y, por lo tanto, evitando daños en el contenido de las células durante la extracción. Ocasionalmente, el homogeneizado resultante se debe filtrar para eliminar el tejido conjuntivo o de otros elementos indeseables.

1. Centrifugación. Este dispositivo contiene un rotor que gira a alta velocidad y que agita el contenido de cada uno de los tubos hacia fuera, de modo que éstos pueden ser separados y recolectados sobre la base de la densidad, gracias la fuerza centrífuga.

OBJETIVOS:  

• Obtener homogenizados puros de hígado de pollo.
• Separar fracciones celulares del hígado, para poder estudiarlo.
• Determinar los componentes en las diferentes fracciones como: núcleo, mitocondrias, etc.
• Identificar el sobrenadante y el precipitado

MATERIALES:

• 10gr de hígado de pollo
• Mortero
• Gasa
• Tubos Ependorf de1.5ml
• 2 beakers de 100ml
• Verde de Janus
• Cubetas con hielo
• 1 beaker de 50ml
• Buffer Tris 10mM (ph 7,5)
• Colorante Hoechst 33258
• Mytotracker
• Laminas y laminillas
• Microscopio de campo claro y de fluorescencia

BIBLIOGRAFIA:

http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/fraccionamiento.htm 

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