Bacterias

“UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA”

FACULTAD DE CIENCIAS AMBIENTALES

CARRERA PROFESIONAL INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

MICROBIOLOGIA AGROINDUSTRIAL

PRACTICA Nº 05

OBSERVACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS

DOCENTE: BLGA. CASTILLO LLANOS, Diana

INTEGRANTES : Marcia Casas Valles

CICLO : V

Yarinacocha - 2013

I. INTRODUCCION

La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnóstico microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de las muestras sometidas a examen cuando se sospecha infección bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y examinadas en el microscopio. Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcohol-cetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).

El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio.

II. OBJETIVOS.

 Manipular adecuadamente la tinción diferencial de gram.

 Diferenciar frente al microscopio las bacterias gram positivas y gram negativas.

 Comprender la importancia que tienen estas tinciones para la caracterización e identificación de las bacterias.

III. FUNDAMENTO

Las tinciones existen de hecho antes que los medios de cultivo. Hoy en día siguen siendo una parte esencial en el diagnóstico microbiológico en la práctica totalidad de los laboratorios.

• Azul de genciana.- colorante de anilina que se utiliza para teñir núcleos. También tiene propiedades bactericidas y basteriostáticas y actividad fungicida

comúnmente denominado cristal violeta o violeta de genciana, es el nombre dado a un grupo de compuestos químicos empleados como indicadores de pH y colorantes.

Los violetas de metilo son mezclas de: N-tetra, N-penta y N-hexametil p-rosanilinas. Por la mezcla de diferentes versiones, el fabricante puede crear diferentes tonos de violeta en el colorante final. Cuanto más metilado esté el colorante, su color será de un violeta más oscuro

• Safranina.- Tambien llamada rojo básico 2, es un colorante biológico de contraste que se utilia en la tinción de gram para proporcionar un color mas violeta a las bacterias gram positivas y tiñe de rojo a las bacterias gram negativas. También se utilia para detectar cartílago, mucina y granulos de mastocitos. La safranina es un dimetil, tiene un grupo metil agregado en la posición orto- del anillo mas bajo.les usado como indicador redox en química analítica

• Lugol.- actua como un mordente, es decir ayuda a la fijación del colorante previo que has aplicado .

• Alcohol – Cetona.- Actua en forma contraria, ayudando a arrastrar el colorante excedente que no haya fijado a las paredes celulares.

IV. MATERIALES.

4.1 material biológico

• Sarro dentario

4.2 material de vidrio

• Lamina porta objeto

• Lamina cubre objeto

• Mechero

4.3 Reactivos

• Violeta de genciana

• Safranina

• Lugol

• Alcohol acetona

...