Determinación experimental de biomoléculas I Proteínas y enzimas

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

Informe de laboratorio N°2 – Biología general

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Tema: Determinación experimental de biomoléculas I Proteínas y enzimas

INTEGRANTES:

AGUIRRE BOTTGER, Cosette

BERROCAL PUITALLA, Frank

CARRILLO RUIZ, Ricardo

ENRIQUEZ ARAUJO, Fabrizio

VASQUEZ VILLALOBOS, Helena

1. RESULTADOS: La presente práctica de laboratorio estuvo dividida en cuatro actividades o experiencias. Estas se centraron en la determinación experimental de biomoléculas. Se observó la desnaturalización y presencia de ciertas proteínas e incluso reacciones relacionadas con actividad enzimática.

1. Desnaturalización de proteínas: Se presentarán las observaciones realizadas durante el desarrollo de la primera experiencia de laboratorio.

Coloración inicial de la albúmina: Sin coloración (transparente)

1. Tubo 1: este tubo de ensayo fue introducido durante 3 minutos en un recipiente de baño maría.

• Contenido del tubo de ensayo: 2 ml de albúmina

Lo que se observó fue el efecto del aumento de temperatura en la proteína albúmina. Durante el tiempo mencionado, la sustancia en cuestión adoptada tonalidades blancas y aumentaba su espesor, es decir, sufría un proceso de solidificación o agregación por calor.

1. Tubo 2:

• Contenido del tubo de ensayo: 1 ml de albúmina + 1 ml de Acetona

Se observó el efecto de un disolvente orgánico en la albúmina. La coloración apreciada fue blanca en los pequeños coágulos globulares formados en la base del tubo de ensayo. El resto de la sustancia tenía la misma tonalidad mencionada pero con menor intensidad.

1. Tubo 3:

• Contenido del tubo de ensayo: 1 ml de albúmina + 1 ml de ácido sulfhídrico (H2S)

Se apreció el efecto de un ácido frente a la albúmina. Si bien es cierto, al igual que con la acetona, la coloración observada fue blanca. En este tubo de ensayo, dicho color predominó en toda la mezcla de manera casi uniforme y en lugar de observarse pequeños coágulos en la base del tubo de ensayo, estos estuvieron suspendidos en toda la mezcla.

1. Tubo 4:

• Contenido del tubo de ensayo: 1 ml de albúmina + 1 ml de NaCl al 20%

En el caso de este tubo de ensayo, el cambio de color se produjo de manera lenta. La albúmina fue tornándose blanca al entrar en contacto con la sal neutra adicionada. Sin embargo, la coloración final propia de una agregación, no tuvo la misma intensidad que lo sucedido con el H2S o la acetona.

1. Tubo 5:

• Contenido del tubo de ensayo: 1 ml de albúmina + 1 ml de ácido nítrico (HNO3)

En este caso también se observó el efecto de un ácido sobre la albúmina. Es decir existió un cambio de pH. La reacción fue rápida, hecho que se evidenció en el cambio brusco de color de la albúmina, la que adoptó una tonalidad amarilla en el mismo momento en que entró en contacto con el HNO3. Además se notó una precipitación clara de la muestra.

1. Tubo 6:

• Contenido del tubo de ensayo: 1 ml de albúmina + 1 ml de agua destilada

Este tubo fue la muestra control de la experiencia. El objetivo de colocarlo se centró en poder realizar comparaciones después de agregar distintas sustancias a los otros tubos con albúmina. Se observó que la albúmina y el agua destilada se mezclaron de manera uniforme y la transparencia de la proteína se mantuvo.

1. Determinación de presencia de proteínas (reacción de Biuret)

Tubo 1:

• Contenido del tubo de ensayo: 1ml de agua destilada + Hidróxido de sodio acuoso (NaOH (aq)) + 2 gotas de sulfato de cobre (CuSO4)

La coloración final observada fue celeste, propia del CuSO4  y la mezcla se mantuvo translúcida. No se apreció ningún  tipo  de burbujeo o cambio en cuanto a la apariencia del agua al entrar en contacto con el NaOH (base fuerte.)

Tubo 2:

• Contenido del tubo de ensayo: 1ml de albúmina+ Hidróxido de sodio acuoso (NaOH (aq)) + 2 gotas de sulfato de cobre (CuSO4)

La coloración final observada fue violeta. No se apreció ningún  tipo  de burbujeo; sin embargo, cuando la albúmina entró en contacto con el NaOH, lentamente se fueron precipitando pequeños agregados en la base del tubo de ensayo.

1. Reconocimiento de la enzima catalasa

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1.- Los trozos de hígado reacciona bruscamente al momento de colocar el agua oxigenada, por lo cual se produce un intenso burbujeo que se expande de manera vertical por un tramo del tubo de ensayo (tubo 4).

2.- El frijol reacciona lentamente al igual que los trozos de papa (tubo 1 y 2).

3.- Los trozos de carne reacciona un poco más lento que los trozos de papa y el frijol; sin embargo, en cuanto al tiempo de reacción total, este fue más prolongado en comparación al hígado (tubo 3).

1. Reacción amilolítica:

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A) Se aprecian las 4 gotas de lugol vertidas, con su color característico anaranjado. A lo largo del desarrollo se la experiencia no se observa ningún cambio de color ni burbujeo.

B) En el momento en el que el lugol entró en contacto con el almidón ya colocado en el recipiente se apreció de manera inmediata un cambio de coloración. La mezcla adquirió un color azul marino oscuro intenso.

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