Determinacion De Coliformes Totales

INTRODUCCION:

DEFINICION:

El Grupo coliforme está constituido por bacterias gran negativas que tienen cierta importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos. Las bacterias de este género se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, pero también ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales.

Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por las heces de humanos y animales. Suele deducirse que la mayoría de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Este grupo está conformado por cuatro géneros principalmente: Escherichia, Enterobacter, Citrobacter y Klebsiella.

Cuando los coliformes llegan a un alimento, no solo sobreviven, si no que se multiplican.

La definición generalmente aceptada para el término “coliformes” describe a estos Microorganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o

Anaerobios facultativos que fermentan la lactosa con producción de ácido y gas,

Aunque algunos pueden ser fermentadores tardíos o no fermentadores, como

Citrobacter y Serratia, respectivamente.

La mayoría de los coliformes pueden encontrarse en la flora normal del tracto

Digestivo del hombre o animales, por lo cual son expulsados especialmente en las

Heces, por ejemplo Escherichia coli. Por esta razón, su presencia constante en la

Materia fecal, los coliformes son el grupo más ampliamente utilizado en la

Microbiología de alimentos como indicador de prácticas higiénicas inadecuadas.

Como los coliformes también pueden vivir en otros ambientes, se distingue entre

Coliformes totales y coliformes fecales. Esta práctica se refiere a coliformes totales.

El uso de los coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para:

• La detección de prácticas sanitarias deficientes en el manejo y en la fabricación de

Los alimentos.

• La evaluación de la calidad microbiológica de un producto, aunque su presencia

No necesariamente implica un riesgo sanitario, cuando los coliformes son de

Origen no-fecal.

• Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias e higiénicas en el equipo.

• La calidad sanitaria del hielo y los distintos tipos de agua utilizados en las

Diferentes áreas del procesamiento de alimentos.

La demostración y la cuenta de microorganismos coliformes, puede realizarse

Mediante el empleo de medios de cultivos líquidos o sólidos con características

Selectivas o diferenciales. Para la cuenta en placa se usa el agar-lactosa-bilis-rojo

Violeta (ABRV).

Los coliformes resisten la presencia de bilis en el medio de cultivo; cuando se

Desarrollan en ABRV, el ácido producido por la fermentación de la lactosa, ocasiona

El vire del indicador rojo neutro y la precipitación de las sales biliares por lo que las

Colonias son color rojo oscuro y generalmente están rodeadas de un halo de sales

Biliares precipitadas, de color rojo claro o rosa.

La posibilidad de contar las colonias se fundamenta en su dispersión y separación,

Como se explicó en la técnica de preparación de diluciones.

NOTA:

Cuando se utiliza el medio de agar bilis rojo violeta (ABRV) para la cuenta en placa de

Coliformes, debe considerarse lo siguiente:

• Si el alimento contiene mono o disacáridos en altas concentraciones, estos

Pueden ser fermentados por otro grupo de microorganismos, generando colonias

Semejantes a las de coliformes.

• El medio no debe esterilizarse ni sobrecalentarse por lo que se debe utilizar antes

De 3 h. a partir de su preparación; en cuanto se disuelva el agar se debe colocar

En baño de agua a 45 °C para mantenerlo fundido, hasta el momento de utilizarlo.

• Debe ponerse una sobre capa de medio una vez que las placas vertidas han

Solidificado, para favorecer las condiciones de microaerobiosis, más adecuadas

Para los coliformes.

• El sobrecalentamiento del medio y las variaciones en las condiciones de

Incubación, especialmente la incubación prolongada, pueden ocasionar la

Formación de colonias rojas de cocos Gram positivos.

• El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al

Diluyente hasta que finalmente se vierten los medios de cultivo en las cajas con

Las muestras de diluciones, no debe exceder de 20 minutos.

OBJETIVO:

Identificar los organismos coliformes en una muestra de jícama, utilizando la técnica de cuenta de placa empleando el uso de medios de cultivos sólidos como el Agar Bilis rojo Violeta, y así cuantificar el número de bacterias presente en el alimento el cual se sospeche esté contaminado con este tipo de microorganismos.

MATERIAL:

• 1 cuchillo y 1 espátula estéril

• 4 pipetas de 5 y 10 ml., estériles.

• 1 frasco de vidrio con tapón de rosca (250ml. De capacidad) con 90ml. De solución diluyente.

• 4 tubos de ensaye con tapón de rosca con 9ml de solución diluyente

• 6 cajas Petri estériles

• 1 Gradilla.

• Mechero

EQUIPO:

 Horno para esterilización

 Autoclave

 Baño maría, y tripeé

 Motor de licuadora

 Vasos de licuadora estériles

 Balanza

 Estufa de incubación

 Contador de colonias

MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS:

• AGUA PEPTONADA (solución diluyente): Disolver los componentes en un litro de agua destilada.

-Peptona 1,0 g

-Cloruro de Sodio 8,5 g

Distribuir en porciones de 90 y 9ml. Esterilizar a 121+ 1,0ºC durante 15 min.

Almacenar en lugar oscuro a una temperatura entre 0º a 5ºC por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición.

• AGAR DE BILIS Y ROJO VIOLETA: pesar 41.5 g y disolver en un litro de agua destilada. Calentar con agitación constante y hervir durante 2 min. Enfriar inmediatamente el medio en un baño de agua hasta que llegue a 45ºC. Evitar el sobrecalentamiento del medio. No debe esterilizarse

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