EXTRACCIÓN DE MACROMOLÉCULAS DE ADN

INTRODUCCIÓN

El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN (y también DNA, del inglés deoxyribonucleic acid), es un tipo de ácido nucleico, una macromolécula que forma parte de todas las células. Contiene la información genética usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria.1

Todas las células, a excepción de las células anucleadas de los eritrocitos maduros en humanos, contienen ADN en sus núcleos celulares. También podemos encontrar ADN dentro de otros compartimentos celulares diferentes al núcleo, como las mitocondrias y los cloroplastos. La cantidad de ADN presente en algunos tejidos es muy pequeña; por este motivo no representa una fuente conveniente de extracción, aislamiento y purificación, para ser empleado en diferentes estudios de carácter genético, biológico. y/o bioquímico. Muchos tejidos contienen alta actividad de desoxirribonucleasa (DNAasa) que rompe la macromolécula en pequeños fragmentos.

Está constituida por tres sustancias distintas: ácido fosfórico, un monosacárido aldehídico del tipo pentosa (la desoxirribosa), y una base nitrogenada cíclica que puede ser púrica (adenina o citosina) o pirimidínica (timina o guanina). La unión de la base nitrogenada (citosina, adenina, guanina o timina) con la pentosa (desoxirribosa) forma un nucleósido; éste, uniéndose al ácido fosfórico, nos da un nucleótido; la unión de los nucleótidos entre sí en enlace diester nos da el polinucleótido, en este caso el ácido desoxirribonucleico. Las bases nitrogenadas se hallan en relación molecular 1:1, la relación adenina + timina / guanina + citosina es de valor constante para cada especie animal.

Estructuralmente la molécula de ADN se presente en forma de dos cadenas helicoidales arrolladas alrededor de un mismo eje (imaginario); las cadenas están unidas entre sí por las bases que la hacen en pares. Los apareamientos son siempre adenina-timina y citosina-guanina. El ADN es la base de la herencia. 2

OBJETIVO:

EXTRAER MACROMOLÉCULAS DE ADN DE LEVADURAS Y BANANO

MATERIALES Y MÉTODOS

• 2 Pipetas

• 2 Vasos de precipitación de 500 ml

• 2 Varillas de agitación

• 2 Papel filtro

• 1 Licuadora

• 3 Tubos de ensayo

Reactivos

TIPO DE REACTIVO CONCENTRACION CANTIDAD

Levadura Saccharomyces cerevisiae 125g

Sal( NaCl) 30g

Alcohol etílico 95% 70ml

Detergente líquido 20ml

Banana

Procedimiento 1

1. Mezclar 125g de levadura con 150 ml de agua fría, 2 g de NaCl 20 gotas de jugo de limón.

2. Agitar suavemente (para que se abran las paredes de las células).

3. Pasar la mezcla por un papel filtro y conservar la pulpa.

4. Repetir el filtrado y conservar nuevamente la pulpa.

5. Preparar 150 ml de agua fría con 2g de NaCl, 15ml de alcohol y dos gotas de detergente líquido.

6. Agregar la pulpa y mezclar (el detergente disuelve el ADN).

7. Revolver suavemente durante 20 minutos.

8. Agregar 21g de NaCl y agitar 10 minutos más.

9. Dejar reposar hasta que se forma un precipitado sólido (se retira). Conservar el líquido.

10. Diluir el líquido con tres veces su volumen de alcohol.

11. El ADN precipita en el fondo del vaso en forma de finas hebras blancas.

Procedimiento 2:

1. En una licuadora, mezclar una banana con agua destilada (250ml).

2. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solución se mezcle.

3. En un vaso de precipitación, preparar una solución consistente de 5 ml de detergente líquido y 5 mg de sal.

4. Agregar 20 ml de agua destilada.

5. Disolver la sal y el detergente revolviendo lentamente con una varilla evitando formar espuma.

6. A la solución preparada en el paso 3, agregar 15 ml de la mezcla de banana del paso 1.

7. Mezclar la solución por 5-10 minutos.

8. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solución de banana, otro miembro pondrá el filtro dentro de un vaso de precipitación. Doblar

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