Enterobacterias -Microbiología General

Instituto Tecnológico de Acapulco[pic 1][pic 2]

Departamento de Ingeniería Química y Bioquímica

Microbiología General

Reporte de Práctica

Práctica N° 9

Aislamiento de Enterobacterias

M.C. Díaz Alday Miguel Ángel

Equipo N° 6

• Guillermo Javier Ehuan Hernández/ 11320431
• Miguel Ángel Rebolledo Alarcón/ 11321249
• Gabriel González Castro/ 11320094
• Guzmán Bello Antonio Abad/ 09320371
• Oscar Miguel González Guillen/ 11320088

Fecha de Elaboración: 07 de Abril del 2014

Fecha de Entrega: 28 de Abril del 2014

Índice

Introducción.- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 3

Fundamento. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 3

Objetivo de la Práctica. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 4

Hipótesis. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -4

Materiales y Métodos. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 5

Aislamiento. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -7

Guía de Identificación Presuntiva. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 7

Reacciones Bioquímicas. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 8

Resultados y Pruebas Fotográficas. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -11

Conclusión. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -14

Bibliografía. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 14

Introducción

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos que fermentan la glucosa en anaerobiosis; citocromo oxidasa negativos; reducen los nitratos a nitritos. Cuando son móviles son flagelados peritricos. Son llamadas enterobacterias porque con frecuencia residen en el aparato digestivo de animales y humanos, pero algunas especies también viven en la tierra y en el agua. Incluye los géneros Escherichia, Shigella, Edwardsiella, Salmonella, Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Serratia, Morganella, Proteus, Providencia, Yersinia, Erwinia y Pantoea. La mayoría forman parte de la flora normal o son bacterias ambientales, a excepción de los géneros Salmonella, Shigella y Yersinia, quienes son causantes de infecciones gastrointestinales; es por eso que cuando se detectan en heces, es muy probable que estén causando daño.

 Cuando las enterobacterias se introducen a un sitio del cuerpo estéril, producen enfermedades como neumonía, infecciones de vías urinarias, septicemia, infecciones neonatales, infecciones de heridas y de cirugías. Se comportan como patógenos oportunistas sobre todo en pacientes inmunocomprometidos.  

A semejanza de las enterobacterias, los géneros Campylobacter y Helicobacter causan enfermedades gastrointestinales. Campylobacter es un bacilo curvo gramnegativo, microaerofílico, con un solo flagelo polar. Causa enteritis aguda. Helicobacter es un bacilo un poco curvo, microaerofílico, con flagelos polares múltiples. Requiere medios específicos para cultivarse. Causa gastritis crónicas y úlceras gástricas y duodenales.

Fundamento

La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal excesivamente amplia. Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios (Bacteroides,  bácilos  Gram positivos, estreptococos), microorganismos entéricos gran negativos y S. faecalis. Cualquier intento por aislar bacterias patógenas de las heces implica la separación de las especies patógenas, usualmente a través del empleo de medios selectivos diferenciales y de cultivos enriquecidos. Las principales causas de trastornos  gastrointestinales agudos incluyen a los virus, las toxinas (de: estafilococos, vibriones, Escherichia coli toxígena), bacilos entéricos Gram negativos invasores, los fermentadores lentos de la lactosa, las Shigellas, las Salmonellas y las campilo bacterias. La importancia relativa de estos grupos tiene grandes discrepancias en las distintas partes del mundo.

Las heces y los raspados rectales son los especímenes de que se dispone con mayor facilidad. Debe anotarse la presencia de sangre, moco o helmintos en la inspección somera inicial. Se suspenden los especímenes en un caldo selectivo como el Caldo de Tetrationato y se cultivan sobre medios ordinarios así como en medios selectivos los diferenciales, por ejemplo Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separación de bacilos gramnegativos que no fermentan la lactosa de otras bacterias entéricas comunes. Los frotis teñidos pueden revelar una prevalencia de leucocitos y de ciertos microorganismos anormales como Cándida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para diferenciar las bacterias entéricas patógenas de las de la flora normal.

Objetivo de la Práctica

Desarrollar las técnicas de aislamiento e identificación de enterobacterias, comprendiendo el significado de las pruebas bioquímicas.

Hipótesis

HIPOTESIS NULA

Identificar las especies patógenas de las vías gastrointestinales a través del coprocultivo y de sus reacciones bioquímicas

HIPOTESIS ALTERNATIVA

1. Sembrar, leer e interpretar algunas pruebas bioquímicas útiles en la identificación de bacterias bacilares Gram negativas.

2. Determinar género y especie de la cepa problema.

Material y Métodos 

I. Aislamiento e identificación de enterobacterias patógenas a partir de heces.

Aislamiento en medios selectivos:

1. La muestra de heces sin orina debe colectarse en un frasco estéril, durante el curso de la enfermedad y antes de instituir el tratamiento. Con un hisopo estéril siembre las heces en frasquitos con caldo-cerebro-corazón o caldo tripticasa. Descargue el inóculo, moviendo el hisopo con cuidado.

2. 

3. Compare el crecimiento de las cepas testigo con las desarrolladas en las heces. - En agar-verde brillante todas las salmonellas, excepto S. typhi, forman colonias rojas o rosas a las 48 hs de incubación. El Proteus mirabilis forma colonias amarillas o amarillo-verdosas con un halo amarillo verdoso. E. coli no crece. - En EMB E. coli forma colonias negruscas o moradas, usualmente con brillo verde metálico. Las shigellas producen colonias sin color - En SS el Enterobacter forma colonias rojas o rosas a las 24 hs.

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