VACIADO EN PLACA MICROBIOLOGIA GENERAL

Vaciado en placa

Dentro del grupo de recuentos microbianos a base decultivos con formación de colonias, la técnica por vaciado en placa es la mas utilizada. La muestra en cantidades conocidas se deposita en cajas petri estériles, y se adiciona el medio de cultivofundido a una temperatura de 45°C y se mezcla con la muestra.

Después de la incubación se cuentan las colonias desarrolladas las que multiplicadas por el inverso de la dilución que corresponda permiteestimar el número de microorganismos viable por gramo o mL de muestra, obviamente con las condiciones de prueba (medio de cultivo, condiciones fisicoquímicas y tipo de colonias contadas), el recuentoobtenido se referirá a determinado grupo de microorganismos. Esta técnica permite la mayoría de las veces cuantificar la contaminación en alimentos, medicamentos.

Requerimientos para medio de cultivo de vaciado en placa

a.- Fuente de carbono

Los microorganismos obtienen su energía a través de la fotosíntesis o de la oxidación de compuestos orgánicos, son capaces de utilizar el CO2 como fuente principal de carbono. El carbono se suministra generalmente en forma de carbohidratos

b.- Fuente de nitrógeno

El nitrógeno es un componente de primer orden de las proteínas y ácidos nucleicos, las fuentes pueden ser los nitratos, nitritos, nitrógeno, amonio y aminoácidos.

c.- Fuentes de azufre

El azufre es uno de los constituyentes orgánicas de la célula, constituye parte de la estructura de diversas coenzimas y se encuentra formando parte de la metionina y cisteína, la mayoría de las bacterias toman el azufre del ión sulfato, otros más lo pueden obtener a partir del H2S.

d.- Fuente de fósforo

Se requiere fosfato como componente de ATP, ácidos nucleicos y coenzimas como el NAD, NADH y flavinas. El fosfato se asimila como fosfato inorgánico.

e.- Fuentes minerales

Algunos microorganismos requieren de iones Mg2+ y ferroso Fe2+, el magnesio es un componente de la molécula de clorofila y el hierro es parte de las coenzimas de los citocromos y las peroxidasas. El potasio se requiere para la función de los ribosomas y el calcio es un constituyente de las paredes celulares de las bacterias Gram positivas

f.- Factores de crecimiento

Se llama factor de crecimiento a la sustancia que favorece el crecimiento pero que el microorganismo es incapaz de sintetizar. Los factores de crecimiento pueden ser vitaminas del complejo B (tiamina, ácido nicotínico, piridoxina, biotina), algunas de estas sustancias se pueden obtener del suero, yema de huevo o sangre.

Reglas para conteo en placa

Seleccionar aquellas placas donde aparezcan de 30 a 300 colonias, pues hay menor error en el conteo.

Contar todas las colonias de la placa. Si el número se estima mayor de 300 y no hay diluciones subsecuentes:

301-500 colonias se divide

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