INFORME DE LISTERIA

INTRODUCCION

Dentro de la gran industria alimentaria se está expuesto a cualquier bacteria que puede estar dentro de los alimentos y que sin saber en algún momento se puede estar consumiendo esto puede generar casos de intoxicación alimentaria un claro ejemplo de esto  es la listeria monocytogenes.

Listeria monocytogenes pertenece a la familia Listeriaceae. Se trata de un bacilo Gram positivo, con un tamaño de 0,5 - 2 x 0,5 micras, patógeno intracelular facultativo del sistema reticuloendotelial y móvil a temperaturas entre 20ºC y 25ºC. En relación con su metabolismo, es anaerobio facultativo, catalasa positivo y oxidasa negativo. La práctica de este laboratorio tiene como fin reconocer si cada una de las muestras traídas al laboratorio tiene recuento de Listeria monocytogenes. (2) ;(3).  

OBJETIVO GENERAL

• Determinar la presencia o ausencia de Listeria monocytogenes, en muestras de queso campesino.

OBJETIVO ESPECIFICO

• Identificar y reconocer el material necesario para el estudio de el microorganismo Listeria monocytogenes.
• Aplicar la técnica para la identificación de Listeria monocytogenes en un alimento mediante el procedimiento de tinción de gram y pruebas bioquímicas.

MARCO TEORICO

Listeria monocytogenes es un bacilo Gram positivo, anaerobio facultativo, catalasa-positivo, oxidasa-negativo, asporógeno.

L. monocytogenes es un bacilo Gram-positivo capaz de crecer a temperaturas de refrigeración; su control en la industria de alimentos ha resultado complejo debido a la ubicuidad en el medio ambiente, así como a la tolerancia a condiciones medioambientales desfavorables como bajos valores de pH, altas concentraciones de cloruro de sodio y su capacidad de formar biopelículas. Lo anterior le permite persistir en equipos y utensilios. Debido a estas razones, puede fácilmente contaminar los productos post-proceso y multiplicarse generando el riesgo de infección al consumidor

Tiene un crecimiento óptimo entre 30 y 35°C. Por debajo de los 5°C aproximadamente, el crecimiento es extraordinariamente lento.

El crecimiento de todas las cepas resulta inhibido a valores inferiores a 5.5 de  pH.  (1)

PROCEDIMIENTO

La técnica utilizada para el aislamiento e identificación de Listeria monocytogenes es la recomendada por la FDA, modificada en algunos aspectos:

El aislamiento de Listeria incluye tres etapas fundamentales:
I. Enriquecimiento selectivo.

II. Siembra en placa en Agar selectivo y diferencial.

III. Identificación.

1. Enriquecimiento selectivo

1. Pesar 25g representativos de la muestra total (tomando tanto de la superficie como de su interior)
2. Añadir 225mL de caldo de enriquecimiento para Listeria (EB)
3. Incubar a 30ºC +/- 2ºC durante 24 – 48 horas

ll.   Siembra en placa con medios selectivos a las 24 y 48 horas.

1. Transferir con un asa del cultivo obtenido en el caldo de enriquecimiento (EB) a placas con Agar Oxford y aislar por agotamiento.
2. Las colonias de Listeria Monocytogenes serán sembradas en las placas de Agar Sim.

1. Incubar a 35ºC +/- 2ºC por 24 – 48 horas.

Tinción de Gram.

1. Seleccionar una colonia.
2. colocar sobre vidrio reloj.
3. Adicionar cristal violeta por 1 minuto. (lavo)
4. Lugol 1 minuto (lavo)
5. Alcohol acetona 45 segundos.
6. Fuchina 45 segundos. (lavo)
7. Dejar secar.
8. 1 gota de aceite de inmersión.
9. Observar en microscopio.

lV.  Siembra en tubos de ensayo

1. Seleccionar 1 colonias típicas de Listeria en cada placa de Agar utilizado.
2. Con asa llevar al fondo del tubo de ensayo.
3. Incubar 35ºC +/- 2ºC por 24 – 48 horas.

V. Identificación de Listeria mediante pruebas bioquímica.

Oxidasa (+) positivo  (fig.3)

*Catalasa: (+) positivo.   (Fig.4)

Colocar en un portaobjeto una gota de peróxido de hidrógeno al 3%. Suspender la colonia. Observar si se producen o no burbujas de gas.

L. monocytogenes es catalasa (+) produce burbuja de gas.

*Movilidad y reducción de nitrato

Inocular con asa recta por punción central tubos con Agar movilidad. Incubar a temperatura ambiente 2 – 5 días.

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