Informe de Microbiologia “TINCIÓN SIMPLE Y TINCIÓN GRAM”

“TINCIÓN SIMPLE Y TINCIÓN GRAM”

Alejandra Llamuca

Laboratorio de Microbiología de Alimentos I[pic 1][pic 2]

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIRÌA EN ALIMENTOS (FCIAL)

UNIVERSIDAD TÈCNICA DE AMBATO (UTA)

RESUMEN

Tinción de Gram:

Dividida en gram positivo y gram negativo, en el caso de los gram (+) la muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta fijada en su estructura determina la presencia de la misma puesto que fijó en su estructura el cristal violeta. Y en el gran (-) utilizamos salmonella identificada por la presencia de muchas estructura un poco triangulares de color rojo. En la muestra de la práctica eran gran positivo por su coloración morada. Se utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)

Tinción Simple:

Estudia levaduras, en este experimento se usa un solo colorante que fue azul de metileno, donde observamos que las levaduras tenían cocos. Estas células bacterianas difieren desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor. Se utiliza un solo colorante.

INTRODUCCIÓN

Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observar se claramente sin algún tratamiento previo. De acuerdo a la reacción que ocurre, existen diferentes tipos de tinción: (Mendoza, 1995)

TINCIÒN SIMPLE

Las tinciones se basan en la utilización de colorantes que pueden clasificarse como naturales o sintéticos. Los naturales se utilizan principalmente con fines histológicos. La mayor parte de los colorantes que se utilizan para teñir bacterias son sintéticos, muchos de ellos son las anilinas y los derivados del benceno. Se habla de coloración simple cuando una muestra extendida se tiñe con un solo colorante. Si la preparación se tiñe con safranina, las bacterias adquirirían un color rojo, si se utiliza azul de metileno, se teñirán de azul, si por el contrario se tiñen con cristal violeta, las bacterias aparecerán teñidas de color violeta, es decir adquirirán el color del único colorante que se utilizó. Este procedimiento permite distinguir la morfología y estructuras internas de la célula bacteriana, como por ejemplo, la presencia de endospora bacteriana. Existen coloraciones especiales que permiten poner de manifiesto estructuras bacterianas como por ejemplo: flagelo, cápsula, endosporas, etc. (Perez, 2003)

TINCIÓN GRAM

Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfologicos distintos de bacterias).

Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano. (Perez, 2003)

El objetivo fundamental de esta práctica es observar las siguientes muestras , utilizando la tinción simple o timcion de Gramm para determinar si es una Gramm positiva (+) o Gramm negatica (-) y a la vez comparar las formas de los diferentes cultivos microbiológicos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Para la práctica se necesitaron principalmente las muestras de cultivos microbiológicos y el microscopio. Para realizar la observación de los diferentes tipos de tinciones, en donde  fue necesario realizar diferentes frotis de las muestras y los colorantes utilizados. Ya sea por tinción simple o tinción Gram.

TINCIÓN SIMPLE

Para la tinción simple se cubrió la extensión que se preparó previamente con azul de metileno, dejando actuar el colorante por 1 minuto. Luego se lavó con agua destilada hasta eliminar el exceso de colorante. Finalmente secar al aire y observar con el objetivo de inmersión.

TINCIÓN GRAM

Para cada muestra, se debio teñir con violeta de cristal por 1 minuto y lavar con agua destilada. Luego se cubrio con lugol por 1 minuto, a continuación se lavo con agua destilada. Decolorar la muestra con el etanol al 95% por 30 segundos y lavar con agua. Finalmente teñir con safranina por 1 minuto, lavar el exceso de colorante con agua y secar al ambiente. Observar con el lente de inmersión.

RESULTADOS

Tabla 1: Forma y agrupación de las células bacterianas observadas

Elaborado por: Llamuca, A ; (2014)                                                    Fuente: Laboratorio de Microbiología I ; FCIAL

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