Informe de práctica de Bioquimica

1. INTRODUCCIÓN

En el análisis cualitativo, se determinó la presencia de los distintos aminoácidos en la muestra proteica. Sin embargo, no todas las muestras se disuelven de la misma forma que la clara del huevo, que es la muestra más sencilla. En algunos casos se requiere de la adición de una sal que precipite a la proteína en cuestión. En una muestra pueden haber más de una proteína, como por ejemplo: Albúmina, Globulina y Caseína. Al tratar esta muestra con una cierta sal, dos de estas precipitan y la otra queda en solución. De esta forma se tiene un método efectivo para separar proteínas para su póstumo análisis u otro tipo de procedimientos.

1. OBJETIVOS

• Aprender a preparar soluciones proteicas de diferentes muestras que contienen proteínas (Ejm. Huevo, Leche, Harina, Carne).
• Realizar el análisis cualitativo respectivo para la determinar la presencia de proteínas en las soluciones proteícas preparadas.

1. FUNDAMENTO TEÓRICO

Para preparar una solución de una proteína, se realizan diferente métodos de separación de la proteína en estudio de las delas proteínas. Existen diferente métodos de separación, tales como:

• Díalisis
• Filtración  en gel
• Cromatografía en general
• Electroforesis.

Estos métodos son los más utilizados para realizar la separación respectiva. Sin embargo, a veces no son necesarios, y se recurren a otros métodos mucho más sencillos, tales como: Hidrólisis y precipitación de proteínas.

Estos métodos sencillos son análogos a las marchas sistemáticas analíticas de cationes en química analítica inorgánica, solo que en este caso, las analitos son proteínas. Utilizando al agua como solvente y soluciones salinas específicas se puede separar cuantitativamente a las proteínas, donde la solución filtrada contiene a una proteína aislada.

Al precipitar a la proteína con una sal, ocurre un incremento en la solubilidad y estos se conoce con el nombre de solubilización por salado (salting in). Al seguir aumentando la salinidad, ocurre probablemente una competencia entre la proteína y la solución salina por las moléculas de agua disponibles para su solvatación, y entonces las interacciones proteína–proteína se hacen más importantes.

El sulfato de amonio tiene una solubilidad muy alta y es la mas que se usa más frecuentemente para el fraccionamiento de proteínas. Una solución completamente saturada se preparada añadiendo 767 g a 1L de agua.

1. DETALLES EXPERIMENTALES

1. Materiales de laboratorio

• Vasos de precipitado
• Probetas
• Embudo
• Cocinilla
• Piceta

1. Reactivos

• Cloruro de Sodio al 10%
• Solución saturada de Sulfato de Amonio

1. Material químico

• Huevos frescos de gallina
• Carne molida desgrasada
• Leche fresca de establo
• Harina de trigo

1. Procedimiento Experimental

1. Óvoalbúmina

Se separó la clara de la yema del huevo fresco de gallina. La solución no se diluyó.

1. Solución diluida de albúmina de huevo

Despues de separar la clara, se batió energéticamente y se mezcló en un matraz con un volumen de agua destilada 10 veces mayor. La solución se filtró a través de una gasa doble previamente remojada en agua.

1. Proteínas de la carne

Se colocaron g de carne molida desgrasada; se añadieron mL de cloruro de sodio al 10% y se dejó reposar la mezcla por 15 a 20 minutos agitando frecuentemente. Le filtró el líquido rojo a través de una gasa doble.

1. Proteínas de la leche

A 25 mL de leche de establo, se añadió un volumen igual de solución saturada de sulfato de amonio. La solución saturada consistió en aproximadamente 19 g de sulfato de amonio en 25 mL de agua. Se formó un precipitado blanco que luego se filtró utilizando una doble gasa.

1. Albúmina vegetal

Se mezclaron 25g de harina de trigo en con 100 mL de agua destilada. Se agitó la mezcla energéticamente durante 30 minutos. Se filtró luego la solución con ayuda de una gasa doble.

1. RESULTADOS

Para las diversas soluciones preparadas, todas estas presentaron las siguientes características:

• Fueron homogéneas y transparentes.
• Al agitarlas suavemente se observó la formación de espuma.
• Dieron resultado positivo para la reacción del Biuret.

Nota: La única muestra que no dio resultado fue la leche, solamente en la última característica.

1.  DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En la preparación de la solución de lactoalbúmina, esta no dio resultado para la prueba de Biuret. El problema puede deberse al medio. Si bien se agregó sulfato de amonio, esta es una sal ácido (proviene del ácido sulfúrico, un ácido fuerte,  y el amoniaco, una base débil). Sin embargo al agregar NaOH, una base fuerte para aumentar el pH rápidamente, apareció una tinción violeta muy tenue, que se observó rápidamente y luego volvió al color azul del reactivo de Biuret. Es posible también que se haya separado poca albúmina, y más bien se haya hidrolizado, y el complejo formado fuera algo inestable.

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