OBTENCION E IDENTIFICACION CROMATOFRAFICA DE PIGMENTOS VEGETALES

OBTENCION E IDENTIFICACION CROMATOFRAFICA DE PIGMENTOS VEGETALES

Resumen

La obtención y reconocimiento de pigmentos vegetales esta dada en su mayoría por su polaridad y solubilidad en solventes orgánicos. La cromatografía en capa fina y de columna nos ayudan a identificar ciertos tipos de pigmentos fotosintéticos; los dos métodos anteriores se usaron en la experiencia de laboratorio para identificar los pigmentos presentes en la hoja de Sauco amarillo (Tecoma stans Juss. Ex Kunth). se pudieron identificar cuatro pigmentos entre los que están:  carotenos con un RF de 0.95, Xantofilas con un RF de 0.875, clorofila de tipo b con un RF de 0.75 y clorofila de a con un RF de 0.725. los anteriores calculados con la placa de cromatografía de capa fina resultante con los pigmentos producto de las separaciones. Tener en cuenta en cada proceso las propiedades químicas de cada molécula de los compuestos a usar, es muy importante para un resultado exitoso en la identificación de pigmentos vegetales.

Discusión

OBTENCION Y RECONOCIMIENTO DE PIGMENTOS VEGETALES

La razón por la que se usó etanol para la extracción de pigmentos de las hojas de Sauco amarillo (Tecoma stans Juss. Ex Kunth), es para que su extracción sea completa y por qué este es soluble en agua, los pigmentos contenidos en sus células tienen una compleja estructura molecular, siendo necesaria la extracción con un solvente orgánico como lo es el etanol, logrando que lo pigmentos que tengan afinidad con este solvente se separen de los cloroplastos de las células. El contenido extraído con este solvente es bastante concentrado y no se nota una diferenciación evidente de pigmentos, pues el pigmento predominante es la clorofila, la cual opaca la notoriedad de la existencia de otros pigmentos.

Después de  la extracción de los pigmentos se le agrega un solvente orgánico insoluble en agua y que pueda disolver y separar los pigmentos para que así el etanol usado anteriormente se disuelva en agua, pues esta técnica se basa en la diferencia de solubilidad de los pigmentos en el alcohol; en nuestro caso usamos hexano como separador. Lo que se logró con esto fue una obtención más limpia de los pigmentos fotosintéticos. Al observar las fases en el embudo de decantación se observa una notoria diferencia entre las dos capas una con los pigmentos y el hexano, y la otra como fluido verdoso de agua y alcohol, este último debido a que los pigmentos solubles en esa mezcla se quedaron en esa fase. En la capa con los pigmentos aún no se evidenciaba diferencia entre los mismos, pues aun predominaba la clorofila.

Al agregar el alcohol metílico, en este se diluyen la mayoría de los pigmentos a excepción de los carotenos que quedan diluidos en el hexano formándose así dos fases, una de hexano y carotenos (con residuos de clorofila) en la parte superior y otra de alcohol metílico que contenía los demás pigmentos en su mayoría clorofilas del tipo a, esta última capa se almaceno y a la fase de hexano se le agrego una solución de KOH en alcohol metílico al 30%. Con el fin de producir un rompimiento del enlace éster presente en las clorofilas, lo que sucede al romperse el enlace éster es que se separa la “cola” de fitol que, hacia insoluble en agua a las clorofilas de su parte soluble compuesta de porfirina, de esta manera al incorporar el agua estas quedan diluidas en la fase acuosa, dejando a los carotenos en la fase de hexano.

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA(CCF)

La cromatografía de capa fina aplicada a los pigmentos vegetales sirve para identificar los pigmentos presentes en una sustancia y su pureza, así como algunas características de estos como su polaridad que es clave en esta técnica. El factor de retención (RF) es una relación entre la distancia recorrida por el compuesto y la distancia recorrida por el solvente o fase móvil, este factor nos indica la polaridad del compuesto siendo que el que tenga un factor de retención más alto es mas apolar, es decir los compuestos más apolares se desplazan a más distancia en el frente cromatográfico. En el primer experimento para esta técnica se usó una solución de hexano y acetato de etilo en proporción 2 a 1como fase móvil y una fase estacionaria de silica gel, y se pusieron a prueba dos compuestos extraídos de las hojas de sauco amarillo. En el primer compuesto los pigmentos que se encontraron fueron carotenos con un RF de 0.975 lo que nos demuestra que son apolares; el segundo compuesto contenía clorofila tipo a con un RF de0.219 Siendo este más polar que el anterior. En el segundo experimento se hicieron dos CCF; la primera de estas se realizó con una solución de hexano y acetato de etilo en proporción 2 a 1como fase móvil y una fase estacionaria de silica gel, se pudieron identificar varios pigmentos entre los cuales están: carotenos con un RF de 0.95 siendo el compuesto mas apolar, Xantofilas con un RF de 0.875, clorofila de tipo b con un RF de 0.75 y clorofila de a con un RF de 0.725 siendo este el compuesto mas polar. La segunda CCF se hizo con una fase estacionaria de silica gel y una fase móvil de diclorometano, en esta se evidenciaron resultados distintos pues solo se desplazó un pigmento que se identificó como caroteno y registro un RF de 0.97 y el resto de los pigmentos permanecieron en el punto inicial. En estos dos últimos hay una diferencia notoria entre los pigmentos que se pudieron identificar, ya que cuando se uso hexano/acetato como fase móvil se desplazaron mayor cantidad de pigmentos que cuando se uso el diclorometano para el mismo fin, en esta ultima solo se desplazaron los carotenos, y las clorofilas permanecieron en el punto inicial, a diferencia del hexano/acetato que hizo que están se desplazaran. Esto se debe a que la fase de diclorometano es mas polar y por esto desplaza menos compuestos que la fase apolar de hexano/acetato.  

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