PRUEBAS BIOQUÌMICAS EN KLEPSIELLA PARA IDENTIFICAR LAS REACCIONES QUIMICAS EN DIFERENTES MEDIOS SELECTIVOS

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PRUEBAS BIOQUÌMICAS EN KLEPSIELLA PARA IDENTIFICAR LAS REACCIONES QUIMICAS EN DIFERENTES MEDIOS SELECTIVOS

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1Instituto Tecnológico Superior de los Ríos, Km 3 carretera Balancán-Villahermosa, Balancán Tabasco C.P 86930; bio_quimica@yahoo.com

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RESUMEN

La realización de las pruebas bioquímicas es de gran importancia ya que permiten determinar las características metabólicas de las bacterias de objeto de identificación.  Algunas de estas pruebas son rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima y su lectura varía entre unos segundos como es el caso de la prueba de la catalasa hidrolizando el Hidrogeno en agua y el oxígeno gaseoso que se libera produce burbujas (solo en caso de que la prueba sea positiva). Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 24 horas.

Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el organismo es capaz de fermentar azucares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de gases, etc. La aplicación de las pruebas bioquímicas y su uso en los medios de cultivo, han colaborado en gran medida a que puedan aislarse microorganismos específicos sin que las colonias formadas por los organismos de interés se afecten por otros microorganismos que inhiban su desarrollo.  En este caso se realizaron pruebas de TSI, LIA, MIO, SIM, UREASA, CITRATO DE SIMMONS Y CATALASA

Palabras clave: pruebas bioquímicas, medios de cultivo, incubación, enzimas.

ABSTRAC

The performance of the biochemical tests is of great importance since they allow to determine the metabolic characteristics of the bacteria of object of identification. Some of these tests are fast, since they evaluate the presence of an enzyme and its reading varies between a few seconds as it is the case of the catalase test by hydrolyzing the Hydrogen in water and the gaseous oxygen that is released produces bubbles (only in case That the test is positive). Other tests require the growth of the microorganism with a previous incubation of 18 to 24 hours for reading.

Biochemical tests have been widely used to differentiate bacteria. These tests are based on demonstrating whether the organism is capable of fermenting sugars, the presence of enzymes, the degradation of compounds, the production of gases, etc. The application of biochemical tests and their use in culture media have contributed greatly to the isolation of specific microorganisms without the colonies formed by the organisms of interest being affected by other microorganisms that inhibit their development. In this case, we performed tests of IST, LIA, MIO, SIM, UREASA, SIMMONS and CATALASA CITRATE

Key words: biochemical tests, culture media, incubation, enzymes.

INTRODUCCION

Los microorganismos a diferencia de las plantas no son capaces de crear materia orgánica a partir de elementos inorgánicos, por eso, han de nutrirse a expensa del medio en que se encuentren, siempre y cuando en el medio se encuentre el alimento que requieren, y de ahí que en el interior de estos ocurran una serie de reacciones de síntesis y de descomposición de sustancias orgánicas, las cuales reciben el nombre de metabolismo.

 A partir de estas características metabólicas se realizan pruebas obtenidas para la identificación de microorganismos y productos obtenidos de la relación microorganismo-medio. Otro de los aspectos importantes de la realización de estas pruebas, es que a partir de estas ayudan a dar una respuesta ante la posible contaminación de los alimentos por medio de microorganismos patógenos.

 Las técnicas de bioquímica han proporcionado una herramienta útil para la detección directa de los microorganismos contaminantes. La identificación bacteriana se puede realizar por medio de una serie de análisis que necesitan de diferentes cultivos y procedimientos para llegar a identificar las especies bacterianas que contaminan los alimentos o las aguas.

A continuación, se desarrollan diferentes técnicas para la identificación de algunos microorganismos y productos obtenidos en la relación ya mencionada, microorganismo-medio.

Donde se podrá observar las características del medio en cuanto a la reacción que le suceda y para ello se utilizaran varios medios: LIA, SIM, TSI, UREA, CITRATO, MIO, CATALASA

MATERIALES Y MÉTODOS

Tabla 1. Materiales y Métodos

Vamos a trabajar con bacterias lácticas que fueron proporcionadas por la docente, las cuales podemos usar son bacterias mesófitas. Se rotulan los tubos con el tipo de medio que se utilizarán, realizar una serie de disoluciones de 10-1 a hasta 10-5.

Se realizan los cálculos para preparar el medio de cultivo en el cual se le agrega cierta cantidad de agua al medio y se pone a calentar en un mechero para que la mezcla se homogenice completamente. Paso seguido los medios son vertidos a los tubos de ensaye correspondientes los cuales se introducen en un recipiente en el cual es llevado a la autoclave para su posterior esterilización; cabe mencionar que no todos los medios son llevados a la autoclave los medios LIA y TSI fueron esterilizado por baño María, después de este de finalizado este proceso los tubos son retirados de la autoclave y colocados en la mesa para que se enfríen y solidifiquen según sea el caso: por ejemplo TSI, LIA, CITRATO, se inclinan para que al solidificarse se cree el pico de flauta y se puede realizar la punción y el estriado en los medios. MIO, SIM, son colocados en la gradilla para que se solidifique y se pueda hacer la punción. En el caso UREA la muestra se toma del medio de cultivo y se introduce en el medio el cual se agita con cuidado para que la bacteria crezca.

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