Baterias Pruebas Bioquimicas

Batería de Pruebas Bioquímicas

Aquí están algunas de las Pruebas Bioquímicas más frecuentes:

• Fermentación de la lactosa (Mc Conkey) • Agar Hierro de Kliger (KIA) • Prueba del Indol • Citrato de Simmons • Agar Hierro Lisina (LIA) • Agar Urea de Christiansens • Prueba de la Fenilalanina (PPA) • Reducción de los Nitratos • Movilidad • RM - VP • Oxidasa y Catalasa

Fermentación de la lactosa (Mc Conkey)

El agar Mc Conkey es un medio sólido, diferencial y selectivo. Se usa para la discriminación de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y -).Composición g/l :

- Peptona 20.0 : fuente de nitrógeno y carbono para las Lac -.

- Lactosa 10.0 : fuente de carbono para las Lac +.

- Sales biliares 2.5 : le confiere carácter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +.

- Cloruro sódico 5.0 : para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis).

- Rojo neutro 0.05 : indicador que va hacer que el medio vire de coloración. Si las bacterias son Lac +, producirán ácidos derivados de la fermentación que darán al medio un aspecto rosáceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificará por el uso de la peptona y se tornará amarillo.

- Cristal violeta 0.001 : interfiere junto con las sales biliares en la selectividad del medio.

- Agar-agar 15.0: da consistencia al medio.

Lac + Lac -

Agar Hierro de Kliger (KIA)

El agar Hierro de Kliger (KIA), es un medio sólido y diferencial. El fundamento se basa en la capacidad de fermentación de dos azucares (glucosa y lactosa), en la producción de ác. sulfhídrico y en la producción de gas. Composicion g/l:

Extracto de carne 3.0 Extracto de levadura 3.0

Peptona 20.0 Lactosa 10.0

Glucosa 1.0 Cloruro sódico 5.0

Citrato férrico amónico 0.5 Tiosulfato sódico 0.5 : fuente de azufre, las bacterias lo reducen produciendo ác. sulfhídrico (precipitado negro)

Rojo de fenol 0.03 : indicador, si vira a rosáceo , indica basicidad del medio, si es amarillo indica acidificación (derivada de ác. de la fermentación)

Interpretación del Kliger:

NC o SC: no cambio o sin cambio LC, Alk o K : alcalinidad

H2S o subíndice s: si produce ác. sulfhídrico G: productora de gas

Ejemplo: A/As indica que es fermentador de glucosa, lactosa y productor de sulfhídrico

1 Fermentador glucosa, productor ác. sulfhídrico y de gas.

2

3 Fermentador glucosa, lactosa y productor de gas.

Prueba del Indol

Pone de manifiesto la presencia de la encima Triptofanasa en nuestras bacterias, si esta presente degradará el triptofano y liberará al medio Indol, para revelar su presencia usaremos el reactivo de Kovac; si hay indol se formará un anillo rojo en la superficie, sino este será amarillo. Para esto sembramos en caldo con triptofano.

Indol+ Indol-

Citrato de Simmons

Cit + Cit -

Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuesto amoniacales como única fuente de nitrógeno. El medio contiene citrato sódico, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador; este se tornará azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradación del fosfato amónico) lo que provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul.

Agar Hierro Lisina (LIA)

Este medio pone de manifiesto:

- Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa (LDC). el medio contiene como indicador Purpura de Bromocresol, cuando la lisina se descarboxila, el medio se acidifica y el indicador vira amarillo en el fondo.

- Si es productora de ác. sulfhídrico, en cuyo caso el precipitado negro nos impedirá ver si es LDC + o -.

- Si es productora de gas.

1. LDC -, NO H2S, PRODUCTORA GAS.

2. LDC

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