PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS

CORPORACIÓN UNIVERSITARIA SANTA ROSA DE CABAL

FACULTADES DE CIENCIAS AGRÍCOLAS Y BÁSICAS

PROGRAMAS AGRONOMÍA Y BIOLOGÍA

 ASIGNATURA BIOQUÍMICA

PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 2

PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Los hidratos de carbono llamados también sacáridos o azúcares, son significativos proveedores de energía, pero realizan también tareas estructurales y de información. Conforman aproximadamente un 2% del peso de  la célula y poseen una gran diversidad de estructuras monoméricas que mediante enlaces glucosídicos dan origen a estructuras más complejas como los disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Químicamente son polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas y algunas estructuras poseen además grupos funcionales nitrogenados, fosforados y azufrados formando parte de azúcares derivados. Están presentes en la mayoría de organismos vivos de allí su gran abundancia en la naturaleza y la importancia de su estudio.  

OBJETIVOS GENERALES:

• Determinar mediante pruebas cualitativas sencillas la presencia de biomoléculas como carbohidratos en muestras problema.
• Identificar algunas características de importancia biológica en los carbohidratos como su capacidad reductora y su  índice de refracción..
• Desarrollar habilidades y destrezas en el uso de los instrumentos y equipos de laboratorio.

MATERIALES:

* Vasos de precipitados        * Papel tornasol azul y rojo        * Gradillas

* Tubos de ensayo                * Pinzas, goteros                        * Papel absorbente        

* Mecheros                        * Varilla agitadora                        * Pipetas

* Cinta de enmascarar        * Trípodes, mallas de asbesto        * Vidrio reloj

* Microscopio                * Portaobjetos y cubreobjetos        * Bisturí

* Refractómetro

REACTIVOS:

* Glucosa, fructosa, galactosa, sacarosa, lactosa, almidón (soluciones al 5%)

* Lugol                * Papel tornasol azul y rojo        * HCl al 10%

* NaOH al 20%        * Reactivo de Benedict                * Zumo de naranja y uva

* Agua destilada

PREINFORME:

Repase los conocimientos adquiridos a nivel teórico sobre los Carbohidratos y responda las siguientes preguntas:

1.¿Qué es el enlace glucosídico? Represente el mecanismo de reacción para su formación

2. ¿Qué son los azúcares reductores?

3. ¿Cuál es la función que cumplen los azúcares reductores en los organismos vivos?

4. ¿Cuáles son los principales azúcares reductores? Identifique nombres y estructuras.

5. ¿Qué son los grados Brix, cuál es el instrumento que se utiliza para la medición de grados Brix y cuál es su aplicación a nivel industrial?

6. Elabore un diagrama de flujo sobre los procedimientos que se desarrollarán en la práctica de laboratorio.

PROCEDIMIENTO:

1. Prueba de Molish

1. Prepare 6 tubos de ensayo (deben estar completamente limpios y secos). 
2. Introduzca en cada tubo de ensayo 2mL de los muestras a evaluar (Tubo 1: Glucosa, Tubo 2: sacarosa, Tubo 3: almidón Tubo 4: celulosa, Tubo 5: ácido oleico, Tubo 6: agua).
3. Adicione a cada tubo de ensayo 3 gotas del reactivo de Molish y agite.
4. Deje resbalar con mucho cuidado por las paredes del tubo de ensayo, 2mL de ácido sulfúrico concentrado (en la interfase entre los dos líquidos debe aparecer un anillo color violeta)

1. Determinación de Azúcares Reductores

Prueba de Benedict:

1. Ponga un beacker con agua en proceso de calentamiento.

2. Prepare 5 tubos de ensayo (deben estar completamente limpios y secos).

3. Introduzca en cada tubo de ensayo 1 mL del reactivo de Benedict.

4.        Agregue a cada tubo de 1mL de la muestra a evaluar (Tubo 1: Glucosa, tubo 2: fructosa, Tubo 3: sacarosa, Tubo 4: lactosa, Tubo 5: almidón).

5.         Mantenga los tubos de ensayo durante 5 a 7 minutos en el baño de agua hirviente y observe el cambio de coloración.

6.         Reporte los resultados en la hoja de respuestas y analícelos con respecto a lo que representan.

Nota: Prueba positiva: coloración naranja

III. Hidrólisis de la Sacarosa

1. Tomar en un tubo de ensayo limpio y seco 3mL de solución de sacarosa.

2. Con mucho cuidado adicionar unas 10 gotas de HCl al 10%

3. Calentar (directamente al fuego) la mezcla, pasándola lentamente por la llama, por un par de minutos (mantenga la boca del tubo alejada de la cara para evitar que le salpique)

4. Neutralizar cuidadosamente la mezcla con NaOH al 20% hasta que el papel tornasol apenas se vuelva azul.

5. Dejar enfriar y realizar la prueba de Benedict como se explicó en el ejercicio anterior.

6.        Observar los resultados, reportarlos en la hoja de respuestas y analizarlos con respecto a lo que representan.

Nota: Prueba positiva: coloración naranja

IV. Prueba del ácido múcico

1. Prepare 3 tubos de ensayo (deben estar completamente limpios y secos).
2. Introduzca en cada tubo de ensayo 3mL de las muestras a evaluar (Tubo 1: Galactosa Tubo:2 Glucosa, Tubo 3: lactosa).
3. Adicione a cada tubo de ensayo 5mL de ácido nítrico concentrado
4. Caliente el tubo durante 90 minutos en un baño María y luego deje enfriar los tubos lentamente al aire (un fino precipitado blanco indica la presencia de ácido múcico y consecuentemente de galactosa. Si no se produce la cristalización espontánea, se puede inducir en los tubos en frío, raspando las paredes internas de los mismos con una varilla de vidrio limpia)

V. Determinación de polisacáridos:

Observación en tubos de ensayo

1. Prepare 3 tubos de ensayo (deben estar completamente limpios y secos).
2. Introduzca en cada tubo de ensayo 1mL de las muestras (Tubo 1: Glucosa o fructosa, Tubo 2: sacarosa o lactosa, Tubo 3: almidón).
3. Adicione 2 gotas de Lugol a cada tubo de ensayo
4. Observe los resultados, repórtelos en la hoja de respuestas y analícelos con respecto a lo que representan.

Nota: Prueba positiva: coloración morada

VI. Observación de los amiloplastos en células de papa:

1.         Con una cuchilla haga un corte muy delgado (transparente) del tejido de una papa, lávelo y deposítelo en un porta objetos, agregue una o dos gotas de agua, colóquele un cubre objetos y observe en el microscopio.

2.         Observe la preparación con dos o tres objetivos diferentes desde menor a mayor aumento. Esquematice en la hoja de respuestas tres o cuatro células e identifique los organelos observables.

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