Informe bioquimica. Pruebas generales para carbohidratos

Pruebas generales para carbohidratos

Cristina barragán

Diana Sofía Fernández

1. Objetivo:  reconocer la presencia o ausencia de carbohidratos (mono, di, oligo o polisacáridos) mediante pruebas generales  y determinar si la muestra problema es o no un carbohidrato
2. Para cada caso, muestre los carbohidratos usados en cada reacción, e indique el color inicial y el color final en la reacción, indique si fue la prueba positiva o negativa para cada uno de los carbohidratos.

1. reacción de Molisch

1. Reacción de Seliwanoff

1. Reaccion de Bial

1. Reacción de Benedict

1. Reacción de Yodo

1. Reacción de Bafored

1. En cada caso explique por qué fue positiva o negativa la prueba

1. Reaccion de Molisch: las coloraciones positivas, se deben el ácido sulfúrico, hidroliza los enlaces glucosidicos, formando monosacáridos y furfural, lo que aporta coloraciones rojos, morada, azul o violeta. Esta reacción se usa para la identificación de monosacáridos no reductores, de esta manera se concluye que los polisacáridos, algunos disacáridos y algunos monosacáridos son no reductores. La fructosa (azúcar de fruta) es el carbohidrato más abundante en las frutas, por consiguiente habrá presencia de este en la muestra de jugo, como se observó con anterioridad la fructosa  es un carbohidrato no reductor, asi que lo que se espera al hacer la reacción de molisch es que el resultado sea positivo. Los resultados concuerdan con la teoría. La muestra problema es una solución, de la cual se desconoce su composición, por tanto no se puede saber si presenta carbohidratos, al aplicar la prueba de molissch, la coloración final (amarillo) indica que esta muestra no presenta carbohidratos no reductores en su composición.
2. Reaccion de Seliwanoff: la deshidratación de las cetosas, forman furfural e hidroximetilfurfural, en condensación con el resorcinal forman un complejo colorado rosado cereza. Esta prueba es característica para detectar cetosas (fructosa, ribulosa, sorbosa, etc.). dependiendo de la coloración final de la reaccion de seliwanoff, si es oscura o intensa, habrá mayor concentración de cetosas en solución. La fructosa es un monosacrido, perteneciente a las cetopentosas, al aplicar la reaccion de seliwanoff, se espera que las compuestos que contengan fructosa u otra cetosa sea positiva y cambie a color rosado cereza, en efecto la fructosa, cambio a color rosado cereza, la muestra de jugo contenia fructosa, por lo tanto esta reaccion tambien fue positiva, por tener presencia de cetosas. La sacarosa es un disacárido, formado por la unión de la alfa D glucosa con la beta D fructosa mediante un enlace glucosidico, al tener la presencia de la fructosa en su estructura, quiere decir que contiene cetosa, por lo tanto se espera que la reacción sea positiva. La galactosa es un disacárido, formado por una molecula de galactosa y una molecula de glucosa, los dos monosacáridos que se acabaron de mencionar no son cetosas, son aldosas y por tanto al aplicar la reaccion de seliwanoff, no habrá presencia de cetosas, por tanto será negativa. Al no conocer la composición de la solucion problema, y aplicar reaccion de seliwanoff, se demostró que esta solucion no presentaba cetosas en su estructura.
3. Reaccion de Bial
4. Reaccion de Benedict: reacción aplicada para determinar azucares reductores, estos azucares reaccionan con el Cu2O para formar complejos de color amarillo rojizo. Los monosacáridos son todos de naturaleza reductora, ya que en su estructura siempre tendrán su grupo hidroxilo libre (grupo OH del carbono anomerico, con propiedades de aldehído y alcohol). Los monosacáridos analizados fueron la glucosa y la fructosa, presentan un grupo OH en su carbono anomerico libre, por tanto ambos son reductores. La figura 1 muestra los carbono anomericos de la fructosa y la glucosa. Como se mencionó con anterioridad, la fructosa está presente en el jugo, por ende el jugo también presenta azucares reductores, por tanto la prueba de Benedict, dara positivo para estas tres muestras. La sacarosa es un disacárido, pero en su estructura se encuentra enlazada tanto el carbono anomerico de la fructosa, como el carbono anomerico de la glucosa, por coniguiente esta molécula no presenta carbonos anomericos libres, ya que se estos se enlasan entre si para formar el enlace glucosidico, por lo tanto la sacarosa es un disacárido no reductor, sin embargo es importante resaltar que no todos los disacáridos son no reductores, hay excepciones como la celobiosa la cual forma un enlace glucocidico entre el carbono beta (1,4), indicando que el carbono anomerico de uno de sus dos beta glucosas, estará libre. En cuanto al muestra problema, solo resta por decir que no se encontraron rastros de carbohidratos no reductores, por la coloración final al realizar la prueba.

Figura 1: estructuras de la glucosa y la fructosa, en donde se ven sus carbonos anomericos libres

[pic 1]

1. reacción del Yodo: el lugol es un colorante usado para el reconocimento de azucares complejas o polisacáridos, no reacciona con azucares simples como monosacáridos o disacáridos. El yoduro forma complejos de absorción, en presencia de almidón forma un complejo color azul turqui u oscuro. Las muestras analizadas eran en su mayoría monosacáridos (fructosa del jugo, ribosa) y disacáridos (galactosa). Previamente se había mencionado que el lugol no reacciona con azucares simples, por lo tanto la coloración que tomaron los carbohidratos ya mencionados solo estaría relacionada con la coloración del lugol. Por tanto al reacciones en este caso fueron negativas, el almidón se hidroliza por medio de enzimas (amilasa) para formar dextrinas y luego formar los oligosacáridos que lo conforman (amilosa y amilopeptina). La amilosa, es uno de los oligosacáridos que forman enlaces de coordinación, estos enlaces tienen forma de resorte, lo cual le permite al yoduro presente en el almidon adherirse con facilidad y teñir la estructura del almidon dando la coloración azul oscuro. La muestra problema no reacciono con el lugol, por tanto no se detectó la presencia de polisacáridos u oligosacáridos.
2. Reacción de Bafored:

1. ¿Qué puede decir acerca de la presencia de carbohidratos en el jugo?

El principal carbohidrato presente en el jugo de naranja fue la fructosa (azúcar de fruta), se conoce que la fructosa es un monosacárido, perteneciente al grupo de las cetohexosas, los monosacáridos son reductores y en presencia de ácidos fuertes y concentrados como el sulfúrico, se pueden volver no reductores, la presencia de cetosas como la fructosa, es posible detectarla mediante la reacción de seliwanoff. Además de la fructosa, la naranja presenta en su composición química a la glucosa un monosacárido del grupo de las aldohexosas. La unión de una fructosa, con una glucosa mediante un enlace glucosidico, forma la sacarosa un, disacárido no reductor, además se pudo comprobar con la prueba del yodo, que el jugo solo presenta en su composición química azucares simples.

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