Practica 1. Permeabilidad De La Membrana

Objetivos

1.- Observar el fenómeno de la hemólisis y explicarlo en función de la diferencias de osmolaridad entre el interior y el exterior de la célula.

2.- Comprobar que la osmolaridad de una solución depende del número de partículas osmóticamente activas y no de su concentración.

3.- Determinar la relación que existe entre el coeficiente de partición y la permeabilidad de la membrana. Explicar el fenómeno en función de la estructura química de la membrana.

Material y Método

Realizamos la toma de una muestra de sangre con una lanceta, de la cual extrajimos 5 gotas de sangre, que colocamos en un tubo de ensayo con una solución salina de NaCl a 0.15 M, y fuimos tomando la cantidades necesarias para las muestras posteriores. Para observar el fenómeno de la hemólisis, agregamos 5 gotas de la muestra inicial a otro tubo de ensayo con solución salina de NaCl a 0.15 M y otras 5 gotas más a un tubo con agua destilada.

Después tomamos 15 tubos de ensayo, que dividimos en 3 grupos de 5 tubos, para llenarlos con diferentes cantidades de NaCl a 0.15 M, CaCl2 0.15 M, y sacarosa 0.15 M y agregamos 5 gotas de la muestra inicial a cada uno de los tubos previamente etiquetados. Observamos si se presentó el fenómeno de la hemólisis en las disoluciones preparadas anteriormente y las revisamos durante un período de tiempo aproximado a los 30 minutos.

Seguido tomamos 2 tubos de ensayo más, colocamos 5 ml de glicerol 0.3 M y sacarosa a 0.3 M respectivamente; añadimos 5 gotas de la suspensión inicial. Con ésta actividad observamos la actividad osmótica de las sustancias difusibles y las no difusibles.

En los últimos 3 tubos de ensayo agregamos alcohol metílico, alcohol etílico y alcohol propílico respectivamente, mezclando con 5 gotas de la suspensión de glóbulos, he inmediatamente medimos el tiempo en el que se llevó a cabo el fenómeno de la hemólisis. Por último comparamos éstos resultados con la hemólisis que se produjo con el agua destilada.

Resultados

Observación de la hemólisis.

Tubo1 (NaCl 0.15M) No presentó hemólisis

Tubo 2 (agua destilada) Sí presentó hemólisis

Actividad osmótica de sustancias no difusibles

Tubo mL NaCl 0.15 M mL de H2O dest. Concentración final (M) Osmolaridad (G=1.8) Hemólisis

1 5 0 0.15 295.1 mOsm NO

2 2 3 0.06 118.06 mOsm NO

3 1.5 3.5 0.045 88.55 mOsm SI

4 1 4 0.03 59.03 mOsm SI

5 0.5 4.5 0.015 29.59 mOsm SI

Tabla 1.1Resultados de osmolaridad y hemólisis para 5 disoluciones de NaCl a diferentes concentraciones.

Para tubo1:

π=gRTC→(1.8)(0.08206 (L atm)/(mol K))(298.15K)(0.15 mol/L)=6.6059atm

6.6059 atm((1 osmol)/(22.38 atm))=0.2951 osmol=295.1 mOsmol

Tabla 2.CaCl2

Tubo mL CaCl2 0.15 M mL de H2O dest. Concentración final (M) Osmolaridad (G=2.6) Presencia Hemólisis

1 5 0 0.15 426.35 mOsm NO

2 2 3 0.06 170.54 mOsm NO

3 1.5 3.5 0.045 127.91 mOsm SI

4 1 4 0.03 85.27 mOsm SI

5 0.5 4.5 0.015 42.63 mOsm SI

Tabla 1.2Resultados de osmolaridad y hemólisis para 5 disoluciones de CaCl2 a diferentes concentraciones

π=gRTC→(2.6)(0.08206 (L atm)/(mol K))(298.15K)(0.15 mol/L)=9.5418atm

9.5418 atm((1 osmol)/(22.38 atm))=0.4263 osmol=426.35mOsmol

Tabla 3.Sacarosa

Tubo mL NaCl 0.15 M mL de H2O dest. Concentración final (M) Osmolaridad Presencia Hemólisis

1 5 0 0.15 163.98 mOsm NO

2 2 3 0.06 65.59 mOsm SI

3 1.5 3.5 0.045 49.19 mOsm SI

4 1 4 0.03 32.80 mOsm SI

5 0.5 4.5 0.015 16.40 mOsm SI

Tabla 1.3Resultados de osmolaridad y hemólisis para 5 disoluciones de sacarosa a diferentes concentraciones

Para tubo 1: π=RTC→(0.08206 (L atm)/(mol K))(298.15K)(0.15 mol/L)=3.67atm

3.67 atm((1 osmol)/(22.38 atm))=0.1639osmol=163.98mOsmol

Actividad osmótica de sustancias difusibles

Tubo 1 (glicerol 0.3 osmolar) Sí presentó actividad osmótica

Tubo 2 (sacarosa 0.3 osmolar) No presentó actividad osmótica

4. Velocidad de difusión

Soluciones Coeficiente partición Tiempo

(Valor experimental)

Alcohol metílico .0097 9 seg

Alcohol etílico .0357 12 seg

Alcohol propílico .156 >10 seg

Tabla 1.4 Se muestra el coeficiente de partición y el tiempo en que se produce la hemólisis.

Gráfico 1.1 Variación del tiempo a partir del coeficiente de partición.

Análisis de Resultados

Observación de la hemólisis.

Tubo 1(NaCl): Después de agregarse las 5 gotas de sangre, la solución se tornó un tanto turbia y rojiza.

Tubo 2 (agua destilada): Después de hacer la mezcla salina y agregar las 5 gotas la solución se tornó rojiza en menor intensidad que la del tubo 1, pero no se observa turbidez.

Actividad osmótica de sustancias no difusibles.

En las tabla1.1 y 1.2 se muestran diferentes sustancias, a diferentes concentraciones. En las tablas se calculó su osmolaridad empleando la Ley de Vant Hoff para electrolitos, representada por:

π=gRTC

Estas sustancias ( NaCl y CaCl2) difieren en su número de partículas disociadas por lo tanto tendrán un valor diferente para G.

Tabla 1.3

La sacarosa es un compuesto que no presenta disociación por lo tanto no tiene valor para G. Se calculó su osmolaridad empleando la Ley de Vant Hoff dada por:

π=RTC

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