REACCIONES GENERALES DE LAS PROTEINAS

UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA. FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD.

PROGRAMA DE MEDICINA. PRIMER SEMESTRE.

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA. PRACTICA No. 9

REACCIONES GENERALES DE LAS PROTEINAS

Diego Alejandro Cortes-Mejía (96052220502); Estefanía Gutiérrez-Ocampo (1094941173);

Juan Fernando Henao-Martínez (97101904125); Laura Daniela Gutiérrez-Rodas (1094952714)

Abril 8 del 2014

Profesor: Vicente Honorio Cediel Collazos, Mg. egutierrez19@utp.edu.co

RESULTADOS.

1. Prueba de Biuret para enlaces peptídicos

• Albúmina

Al agregar 5 gotas de CuO4 a 2 mL de Albúmina, la mezcla se torna de una coloración blanca-gris. Cuando se le agrega a dicha sustancia 2 mL de NaOH 2M la mezcla se tiñe de un color violeta claro de consistencia viscosa semejante al aceite. Es una reacción exotérmica.

• Caseína

Al agregar 5 gotas de CuO4 a 2 mL de Caseína, la mezcla se tiñe de un color violeta-azul. Cuando se le agrega a dicha sustancia 2 mL de NaOH 2M se produce una reacción exotérmica y el compuesto toma una coloración violeta más clara que la albumina.

• Gelatina

Al agregar 5 gotas de CuO4 a 2 mL de gelatina, la mezcla toma una coloración violeta claro. Cuando se le agrega a dicha sustancia 2 mL de NaOH 2M se produce una reacción exotérmica y la coloración violeta se intensifica.

• Glutatión

Al agregar 5 gotas de CuO4 a 2 mL de Glutatión la mezcla toma un color blanco-gris de consistencia turbia. Al adicionarle 2 mL de NaOH 2M se torna traslucido y al agitarlo la coloración se vuelve amarilla.

2. Desnaturalización por calor y pH extremos

Se añadieron 5 mL de una proteína a tres tubos de ensayos, luego se agregaron 0.5 mL de HCl 1M a uno, a otro 0.5 mL de NaOH 1M y al tercero 0.5 mL de agua. Después fueron expuestos al calor en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos y luego enfriados a temperatura ambiente. Se observaron los resultados. Por último se ajustaron los tubos ácidos y alcalinos hasta la neutralidad. Estos fueron los resultados:

Albumina Caseína Gelatina Glutatión

HCl Después del calor, solución turbia, con pH=1. Es neutralizado con 7 gotas de NaOH 1M. Después del calor se torna blanca la solución, pH=2. Es neutralizado con 2 gotas de NaOH 1M. Después del calor se mantiene casi incolora, con pH=2. Es neutralizado con 12 gotas de NaOH 1M. Después del calor se mantiene casi incolora, con pH=2. Es neutralizado con 10 gotas de NaOH 1M.

NaOH Después del calor, solución turbia, con pH=14. Es neutralizado con 9 gotas de HCl 1M. Después del calor solución es blanca, con pH=14. Es neutralizado con 12 gotas de HCl 1M. Después del calor solución casi incolora, con pH=10. Es neutralizado con 8 gotas de HCl 1M. Después del calor, solución casi incolora, con pH=14. Es neutralizado con 8 gotas de HCl 1M.

Agua Después del calor, solución turbia, con pH=9. Es neutralizado con 1 gota de HCl 1M. Después del calor, solución blanca, con pH=14. Es neutralizado con 7 gotas de HCl 1M. Después del calor, solución casi incolora, con pH=8. Es neutralizado con 1 gota de HCl 1M. Después del calor, solución casi incolora, a pH neutro.

3. Precipitación por metales pesados

• Albúmina

Al agregar 5 gotas de CuSO4 a 2mL de Albúmina, se produce una mezcla azulada de consistencia turbia, es decir, con pequeños solidos suspendidos en el compuesto. Al agregar un exceso de reactivo aumenta la tonalidad azulosa y los sólidos suspendidos se agrandan y precipitan al fondo del tubo de ensayo, formando dos fases.

• Caseína

Al agregar 5 gotas de CuSO4 a 2mL de Caseína, se produce una mezcla violeta con pequeños solidos suspendidos dentro de la misma. Con un exceso del reactivo los sólidos se agrandan y precipitan, formando dos fases.

• Gelatina

Al agregar 5 gotas de CuSO4 a 2mL de Gelatina, la tonalidad se torna un poco azulosa, pero no deja de ser traslucida. Con un exceso aumenta la tonalidad y se ven pequeños gránulos dentro de la sustancia.

• Glutatión

Al agregar 5 gotas de CuSO4 a 2mL de glutatión, se forma una mezcla de consistencia turbia-viscosa y de tonalidad azulada. En exceso del reactivo aumenta la viscosidad, formando partículas suspendidas en la sustancia que caen lentamente hasta formar una segunda fase en el fondo del tubo de ensayo.

4. Precipitación por reactivos ácidos.

• Albúmina

Al agregar 5 gotas de ácido pírico a 1mL de Albúmina se forma una mezcla amarilla y de consistencia turbia, que en exceso de reactivo aumenta su consistencia y se forma un precipitado que cae rápidamente y forma una 2 fase.

Al adicionarle lentamente NaOH la coloración y la consistencia de la sustancia se normalizaron hasta disolverse completamente el precipitado y quedar completamente una sustancia homogénea y de color amarillo, justo igual a como estaba antes de agregar un exceso de ácido.

• Caseína

Al agregar 5 gotas de ácido pírico a 1mL de Caseína se forma una mezcla de color amarillo y consistencia turbia con un leve precipitado. En exceso se agranda el precipitado que cae lentamente y se distinguen perfectamente 2 fases.

Al adicionar lentamente NaOH el precipitado se disuelve y la mezcla se vuelve homogénea otra vez de color amarillo.

• Gelatina

Al agregar 5 gotas de ácido pírico a 1mL de Gelatina se forma una mezcla amarilla que en exceso se vuelve viscosa. Sin embargo al añadirle lentamente NaOH pierde la consistencia turbia y continua siendo de color amarillo.

• Glutatión

Al agregar 5 gotas de ácido pírico a 1mL de Glutatión se torna levemente amarillo. En exceso parecen formarse pequeñas fibras suspendidas dentro de la mezcla. Al añadir NaOH no se produce un cambio aparente.

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN.

1. Prueba de Biuret para enlaces peptídicos

La reacción de Biuret se realiza en proteínas o polipeptidos ya que la reacción se da por la participación de los atomos involucrados en los enlaces peptídicos (-CO-NH-). Los cuales se destruyen ante la presencia de bases, en especial alcalís concentrados. En este caso al dar un gran aporte de iones Hidroxilo se reacciona con el amino positivo del enlace peptídico. Esto produce un compuesto independiente denominado Biuret

El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina, en este caso NaOH. La reacción se fundamenta en la conformación

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