Reconocimiento y cromatografía de carbohidratos

 Laboratorio N°3[pic 1]

Reconocimiento y cromatografía de carbohidratos

Objetivos de la práctica:

Integrar y aplicar conocimientos teóricos de carbohidratos

Conocer métodos generales de reconocimiento de azúcares reductores.

Separar e identificar mediante cromatografía en papel los hidratos de carbono presentes en una muestra.

Entregar al alumno los reconocimientos básicos para desarrollar análisis de carbohidratos.

Fundamento Teórico:

Los glúcidos, también llamados azúcares o sacáridos, son un grupo de biomoléculas orgánicas muy abundante en la naturaleza. Los carbohidratos, o azucares, son compuestos solubles en agua, son componentes "pasivos" de la maquinaria celular, destinados a servir de combustible metabólico o a formar parte de estructuras más o menos permanentes de las células. Los polisacáridos son grandes polímeros de carbohidratos constituidos por unidades llamadas monosacáridos, que son las unidades de azúcar más simples. Los oligosacáridos son compuestos formados por unos pocos residuos de monosacáridos que pueden estar unidos a proteínas. Los oligosacáridos juegan un papel fundamental en lo que se refiere al funcionamiento, estructura celular y procesos de reconocimiento de señales extracelulares.

Reconocimiento de azúcares reductores.

Los monosacáridos (y algunos otros azúcares) con un átomo de carbono anomérico libre son buenos agentes reductores y pueden reducir el peroxido de hidrogeno, ciertos metales (Cu+2 y Ag+) y otros agentes oxidantes. Los azúcares que pueden llevar a cabo este proceso son conocidos como azúcares reductores. La adición de CuSO4 en medio alcalino (reactivo de Fehling) a una aldosa en solución, produce la precipitación del compuesto de color rojo oxido cuproso (Cu2O), convirtiendo el azúcar en un ácido aldónico.

Reacción de Fehling: Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). Si el glúcido que se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción del sulfato de cobre (II) (de color azul) a óxido de cobre (I) (de color rojo-anaranjado). En general, si existe un carbono anomérico libre, puede dar positiva en un azúcar más complejo. La lactosa es un buen ejemplo de ello, ya que siendo un disacárido es considerada un azúcar reductor.

[pic 2]

Cromatografía en papel de azúcares.

La cromatografía en papel se utiliza para compuestos muy polares o polifuncionales. El uso más común es para azúcares, aminoácidos y pigmentos naturales. En esta cromatografía se utiliza el fenómeno de partición en donde la fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el papel) que en realidad forma parte de la fase estacionaria que es el agua. Las fases móvil y estacionaria estarán en contacto en una gran interfase, lo que permite una rápida obtención de una distribución de equilibrio del soluto entre ellas. Si la muestra problema está formada por más de un soluto, éstos se separan por sus diferentes coeficientes de partición. En esta cromatografía en papel, el solvente (fase móvil) ascienda por capilaridad (técnica ascendente) o descienda por capilaridad y gravedad (técnica descendente). La fase estacionaria es un complejo celulosa - agua que tiene un poder diferente que el del agua pura. Para la evaluación, se efectúa el cálculo del Rf para cada componente de la mezcla (ver figura) que es característico de cada compuesto en condiciones constantes: soporte, temperatura, solventes. El Rf toma valores entre 0 y 1 y puede ser usado para la identificación de los componentes de una muestra.

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Frente del solvente

Punto de aplicación

Cálculo del Rf:

Rf = distancia recorrida por la muestra / distancia recorrida por la fase móvil.

En el ejemplo del dibujo, para la mancha N° 4, el Rf será b / a.

Experiencia Práctica

Materiales:

- 5 pipetas Pasteur                        - 1 vaso 100 ml                        - 1 vaso 100 ml          

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