SEMINARIO RESPUESTA CELULAR-HUMORAL

SEMINARIO RESPUESTA CELULAR.

ALUMNA ISABEL IGUACEL AZORÍN

El objetivo del presente seminario fue revisar un caso práctico de una aplicación de Inmunidad celular. La inmunoterapia celular se utiliza en enfermedades como el cáncer (por ejemplo en el melanoma, muy agresivo pero muy inmunogénico) en aquellos casos en los que los tratamientos clásicos no han funcionado, bien porque la mutación sigue en el paciente o porque el cáncer es resistente. Las células tumorales tienen muchas mutaciones en el mecanismo de apoptosis y por tanto no mueren. Entre las alternativas existentes está estimular el sistema inmune del paciente ya que éste permite eliminar las células tumorales. Para reactivarlo podemos manipularlo e inyectarlo al paciente posteriormente.

La finalidad es aislar a los linfocitos del paciente. Para ello sacaremos sangre y aislaremos los linfocitos con la técnica Ficoll aislando las células dependiendo de su densidad. En la zona intermedia (entre el Ficoll y la sangre) se quedan los linfocitos y las células mononucleadas. Dentro de los linfocitos están los B, los T y los NK los cuales se diferencian por marcadores de membrana. Para aislarlo existen diferentes tecnologías:

1. Formación de rosetas (desfasada): poner en la superficie de los glóbulos rojos proteínas que se unieran de modo específico a las células T que quería estudiar.

2. Citometría de flujo: podemos marcar las células con sustancias fluorescentes y pasarlas por un láser y separarlas en función de su color (de su fluorescencia). Se ponen los AC específicos marcados con distintos colores. Al pasarlos por el citómetro carga a las células con carga positiva (verdes) y con carga negativa (rojas) o sin cargas las que no tienen color. El problema de esta técnica es que cuando yo incido con un láser la célula sufre y un porcentaje de células morirán y no serán válidas. Funcionan generando un flujo al que se aplican ultrasonidos por lo que las células se cargan eléctricamente en su membrana,  de esta forma, al pasar por un campo eléctrico son desviadas en función de su carga.

3. Citotoxicidad por Ac: permite eliminar la población celular con la ayuda de Ac que fijan el complemento.

Para saber qué método emplear hay que tener en cuenta aspectos como la cantidad de células que se quieren separar, el rendimiento o la  pureza entre otros.  

Entre los ensayos para evaluar la función de los linfocitos, la  exploración funcional de los linfocitos  nos permite entender los mecanismos reguladores y moleculares asociados a la activación de los linfocitos B. Estas técnicas aportan información sobre cómo responden estas células ante los mitógenos o Ag.  

Los ensayos de proliferación de linfocitos T y B se realizan con mitógenos y provocan la activación de rutas metabólicas que conducen a la expresión de genes, la síntesis de proteínas y la diferenciación de los linfocitos. Otros ensayos importantes son los que detectan células T y NK que permite estudiar la respuesta de las diferentes poblaciones y subpoblaciones celulares de linfocitos T y el estudio de la producción de Ac por las células B.

Con  los  cultivos  celulares  se  ha  podido  estudiar  los  mecanismos  que  controlan  a  las  células  B  y  T incluyendo cambios genéticos.  Todos estos experimentos se han llevado a cabo en animales manipulando su material genético. En el caso de los ratones destacan los distintos grupos como los SCID (poseen alteraciones en las células B y T por lo que tienen unos mecanismos  de  defensa  pobres),  los  ratones  desnudos (carecen  de  timo),  los  transgénicos (poseen genes clonados) y los ratones Knockout (carecen de un gen determinado). En todos estos experimentos se ha llevado a cabo una exploración de los genes del SI, para ello se han empleado instrumentos como chips genéticos que permiten examinar el nivel de expresión de miles de genes  simultáneamente  de  esta  forma,  diferentes  tipos  de  células  o  tejidos  pueden  ser  comparados.

Por último se hace referencia a los instrumentos Microarrays (chip de ADN). Se mide el nivel de hibridación entre la sonda específica (probe), y la molécula diana (target), y se indican generalmente mediante fluorescencia y a través de un análisis de imagen, lo cual indica el nivel de expresión del gen.

SEMINARIO RESPUESTA HUMORAL.

ALUMNA ISABEL IGUACEL AZORÍN

La reacción Ag-Ac está influida por la naturaleza de las moléculas que intervienen, es decir, está condicionada por su estructura y el tipo de unión que establecen (puentes de hidrógeno, fuerzas electrostáticas entre grupos carboxilo y amino, interacciones hidrófobas, fuerzas de Van der Waals o inducción estructural), así como de la afinidad y la avidez. La afinidad de un Ac es la energía de enlace contenida en cada uno de los sitios de unión del Ac y la avidez es el grado de interacción entre un Ac y su Ag homólogo.

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