Solubilidad de las proteínas

INTRODUCCION:

El proposito de este experimento es asilar una proteína (caseína) de una fuente natural

(leche) y demostrar que el producto obtenido es en sí una proteína llevando a cabo una

serie de pruebas a su producto Favor de repasar la estructura y la química de proteínas en

su libro de texto.

TEORIA

Solubilidad de las proteínas: Las proteínas son macromoléculas que son solubles

(¿suspendidas?) en agua. Las proteínas son menos soluble en agua cuando están en su

punto isoeléctrico y son más solubles a valores de pH más altos o bajos. La solubilidad a

valores de pH’s diferentes al punto isoeléctrico aparenta deberse a un exceso de grupos

catiónicos o aniónicos expuestos en la superficie de la proteína. Si la proteína está

negativamente cargada a pH mayores de su punto isoeléctrico, cuando dos proteínas

chocan una con la otra las cargas negativas se repelen y no se aglomeran como se

esperaría de moléculas grandes. Sin embargo, en el punto isoeléctrico de la proteína no

existe carga neta. Cuando un extremo negativo de una proteína se encuentra de frente con

el extremo positivo de otra proteína, la atracción electroestática causa que las dos

proteínas se peguen. Otras proteínas tropiezan con el dímero y se unen al grupo.

Eventualmente, un número grande de proteínas formaran un agregado tal, que la proteína

precipita. En este experimento, caseína (pI = 4.6) se precipitará a partir de la leche (pH

7) por adición de ácido acético glacial.

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BIOQUÍMICA – HARRY ALICES-VILANUEVA, PH.D.

PRUEBA PARA PROTEÏNAS

Prueba Biuret: La prueba Biuret es una prueba general para proteínas, no

especifica. Cuando una proteína reacciona con sulfato de cobre (II) (color azul) se

forma como respuesta positiva un complejo color violeta.

La prueba Biuret trabaja para cualquier tipo de compuesto que posea uno o más

de los grupos siguientes:

Prueba de Ninhidrina: La prueba de ninhidrina es positiva para aminoácidos y

proteínas que tengan un grupo -NH2 libre. Cuando el grupo -NH2 reacciona con

ninhidrina, se forma un complejo azul-violeta.

AZUL

VIOLETA

AZUL-VIOLETA

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Prueba Xanthproteica: Los anillos fenilo que contengan un grupo activante

pueden ser nitrados produciendo un compuesto Amarillo:

Compuesto amarillo

La producción de un producto coloreado Amarillo al añadir ácido nítrico es una

prueba para la presencia de tirosina o triptófano en una proteína. La adición de

base fuerte hace que el color se torne más oscuro hacia anaranjado. Las manchas

amarillas en la piel causadas por ácido nítrico son el resultado de la reacción

xanthoproteíca.

Prueba para metales pesados: Los metales pesados tienen el efecto de precipitar

proteínas de sus soluciones creando enlaces (cross-linkings) entre los grupos

amino libres y los grupos carboxilo libres.

Los iones más comúnmente usados para detector la presencia de proteínas

incluyen Zn2+, Fe3+, Cu2+, Sb3+, Ag1+, Cd2+, and Pb2+.

Entre los metales, Hg2+, Cd2+, and Pb2+ tienen una alta toxicidad. Estos pueden

causar serios daños a las proteínas (especialmente enzimas) denaturándolas.

Victimas que han ingerido iones de mercurio o plomo (Hg2+ o Pb2+ ) se tratan con

un antídoto de algún alimento rico en proteínas. La proteína se combina con los

iones de mercurio y plomo minimizando la absorción de tales iones. Los alimentos

más usados son leche y clara cruda de huevo. La proteína que se precipita es

removida inmediatamente del estómago mediante un lavado estomacal.

PRECIPITADO

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Aislamiento de la Caseína

1. A un matraz Erlenmeyer de 250-mL añada 50.0 g de leche y caliente en una

hornilla dentro de un beaker de 600 mL conteniendo 200 mL de agua.

2. Agita la solución constantemente con una varilla de cristal.

3. Cuando la temperatura del baño llegue a 40o C, remueva el matraz del baño de

agua y añada cerca de 10 gotas de ácido acético glacial

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