TIPOS DE MICROSCOPIAS CARRERA EN INGENIERIA EN ALIMENTOS

UNIVERSIDAD  TÉCNICA DE AMBATO[pic 1][pic 2]

FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

CARRERA EN INGENIERIA EN ALIMENTOS

MICROBIOLOGÍA

Docente: Ing. Paulo Baquero

Estudiante: Alba Anchatuña Checa

Nivel: Tercero Alimentos “U”

Fecha: Ambato 8- 11- 2016.

Tema:   “TIPOS DE MICROSCOPIAS”

La microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal. El elemento central es el microscopio ya que, el uso del mismo se requiere para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de métodos y técnicas afines pero extrínsecas al aparato (Navarro, 2015).

Existen algunos tipos de microscopia entre ellos citaremos tres:

• MICROSCOPÍA EN CONTRASTE DE FASE: 

Funcionamiento:

Se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es ideal para especímenes delgados, o células aisladas. El microscopio de fase ilumina el espécimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz es más estrecho y entra en el campo de visión del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminación provoca variaciones minúsculas en el índice de refracción de un espécimen transparente, haciéndolo visible (Herrmann, 2013).

Aplicación:

Este microscopio es muy útil a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biología y medicina  (Tecnólogos Médicos de Chile, 2015).

Grafico # 1: Partes de la microscopia de contraste de fase

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Fuente: (Herrmann, 2013).

• MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA:

Funcionamiento

La microscopia de fluorescencia utiliza una sustancia natural en las células o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayas luminosas proceso conocido  como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del colorante. El microscopio de fluorescencia incorpora una lámpara especial, que actúa emitiendo una luz excitadora de los fluorocromos, con los que se tiñen las muestras a observar, y que posee además un filtro especial, que permite el paso de la luz emitida por el fluorocromo, gracias a la presencia de estos elementos químicos emite luz visible cuando sobre ellos incide una radiación intensa; en otras palabras, absorben una luz de una longitud de onda determinada por ejemplo luz ultravioleta o luz monocromática azul y luego emiten otra luz de una mayor longitud de onda de un determinado color, verde, rojo, amarillo (Herrmann, 2013).

Aplicaciones de la microscopia de fluorescencia

Su uso se convierte en una herramienta de inestimable valor para la investigación científica, ya que permite alcanzar altos niveles de sensibilidad y resolución microscópica, permitiendo una apreciación diferente de la información que se puede obtener de los especímenes, generalmente es utilizada en el campo de la medicina para estudios inmunológicos (Herrmann, 2013).

Requerimientos para el microscopio de fluorescencia

• Fuente de luz: Se necesita una intensa fuente de luz para excitar la fluorescencia en el espectro específico de cada fluorocromo. La luz debe ser de una longitud de onda corta, en la cual se emplean lámparas de mercurio a alta presión que funcionan de un modo diferente a las lámparas de filamentos incandescentes. También se utiliza luz ultravioleta y rayos laser.

• Filtros: Son los que permiten el paso de luz de una determinada longitud de onda, la del rango y color necesario para excitar al fluorocromo y bloquean las longitudes no deseadas.

• Objetivos: Deben tener gran capacidad para transmitir la luz y proveer una imagen de alta calidad. De igual manera deben poseer una gran apertura numérica.

(Herrmann, 2013).

Muestras:

Pueden presentar autofluorescencia ó estar teñidas con fluoróforos: 

• Anticuerpos conjuga dos
• Hoecht (tiñe DNA)
• Expresión de proteínas de fusión fluorescentes (GFP)
• Pueden estar vivas o fijadas.

(Herrmann, 2013).

Grafico # 2: “Esquema básico de la iluminación en el microscopio de fluorescencia”.

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Fuente: (Tecnólogos Médicos de Chile, 2015)

• MICROSCOPÍA LÁSER CONFOCAL

 
Funcionamiento:

Su éxito se debe a las indudables ventajas que ofrece frente a la microscopía óptica tradicional (imágenes de mayor nitidez y contraste, mayor resolución vertical y horizontal, etc.) y, sobre todo, a la posibilidad de obtener "secciones ópticas" de la muestra, lo que permite su estudio tridimensional. La mayor parte de las muestras observadas con microscopía óptica son traslúcidas o, en el caso de ser opacas, su superficie de reflexión no se encuentra perfectamente pulida. En ambos casos la luz interacciona con la muestra a varias profundidades por lo que la imagen que llega al observador presenta áreas borrosas debidas a la luz procedente de zonas fuera del plano de enfoque, lo que produce una degradación en el contraste y resolución de la imagen (Herrmann, 2013).

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